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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 外源基因稳转细胞的检测问题
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sarah-miao

银虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by myfinalway at 2012-12-08 19:53:08
表达部分也可以分两种方法来确定，最好是两种都有：
1.你的目的蛋白后面带GFP，然后用油镜看荧光，油镜下可以确定蛋白在细胞核还是细胞浆还是膜上
2. 如果WB做得出来了，再用核蛋白、膜蛋白提取试剂盒来提取转染 ...

这样哈，谢谢啦，学习一下，细胞在传代了呢，看做WB情况怎么样先，然后考虑考虑你的建议哈
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11楼2012-12-09 15:24:36
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sarah-miao

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by myfinalway at 2012-12-08 12:30:59
WB 首先你要保证你的抗体可以与表达蛋白反应
另外如果转染的载体上有标签蛋白，可以用标签抗体来做
如果可以，建议你把GFP蛋白插到你的目的蛋白后面，如果转染成功，开始表达了，可以用荧光显微镜直接观察，不用破 ...

请问下下会不会出现GFP表达，但是目标基因没有表达的情况呢？
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12楼2013-05-20 16:29:42
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春天里的麦子

银虫 (初入文坛)
同位素标记一下就好么
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真奇妙
13楼2013-05-20 17:47:16
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sarah-miao

银虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 春天里的麦子 at 2013-05-20 17:47:16
同位素标记一下就好么

e ,一般分子生物学实验室是不做同位素标记的吧，你们做的么？
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14楼2013-05-20 21:07:25
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春天里的麦子

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by sarah-miao at 2013-05-20 21:07:25
e ,一般分子生物学实验室是不做同位素标记的吧，你们做的么？...

我错了，学化学的飘过    为啥不标记呢，那么简单明了
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真奇妙
15楼2013-05-22 23:15:10
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sarah-miao

银虫 (正式写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 春天里的麦子 at 2013-05-22 23:15:10
我错了，学化学的飘过    为啥不标记呢，那么简单明了...

好吧，学生物的不做同位素标记的，上次听老师说貌似同位素操作还需要参加专业培训。。。
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16楼2013-05-23 15:29:33
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研究室新生

铜虫 (小有名气)
请问楼主，PCR初步检测的话是选择P全长片段吧？我还见过有P抗性基因片段的？不知道哪个更靠谱？
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人生是一棵不停生长的树。
17楼2014-04-23 16:57:25
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sarah-miao

银虫 (正式写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 研究室新生 at 2014-04-23 16:57:25
请问楼主，PCR初步检测的话是选择P全长片段吧？我还见过有P抗性基因片段的？不知道哪个更靠谱？

P转基因的全长片段啊，抗性基因不需要P的
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18楼2014-04-25 14:39:27
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研究室新生

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by sarah-miao at 2014-04-25 14:39:27
P转基因的全长片段啊，抗性基因不需要P的...

哦，好的啊。。谢谢哎~~那请问这是注册申报材料中必需的检测项和检测方法吗？还有其他检测项吗？
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人生是一棵不停生长的树。
19楼2014-04-29 09:17:49
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sarah-miao

银虫 (正式写手)
引用回帖:
19楼: Originally posted by 研究室新生 at 2014-04-29 09:17:49
哦，好的啊。。谢谢哎~~那请问这是注册申报材料中必需的检测项和检测方法吗？还有其他检测项吗？...

那我倒不知道啦，我这是做的硕士生实验，没有申报专利呢
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20楼2014-05-05 15:17:27
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