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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何进行表达载体构建
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yanglx1991

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
sj082csh: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-04-05 14:36:31
一般进行酶切、然后酶连，但一定得注意其bilious
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21楼2012-12-14 11:52:12
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dkyy970111

铁杆木虫 (小有名气)

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有现成的载体卖，买一个克隆进去就可以了
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打铁还要自身硬
22楼2012-12-14 13:08:13
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czdaeq

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2012-12-14 21:13:42
sj082csh: 金币+4, ★★★很有帮助 2013-04-05 14:36:15
这个很难说明白，不过一般步骤，你可以依据看的文献，总结一下他们1、用啥载体，多少拷贝，是由什么改造而来；2、什么启动子；3、表达什么类型的基因（途径酶？膜蛋白？特殊功能蛋白）；4、采用诱导型还是组成型？5、载体构建采用什么方法：传统酶切连接？融合PCR？CPEC？
然后在从中挑选1、频率最高；2、发表期刊水平最高。
这样就挑好模板了，剩下就该实际摸索了。
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23楼2012-12-14 18:01:15
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静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
sj082csh: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-04-05 14:36:08
可以根据你做的内容查询相关的文献，会介绍的很详细的，我们实验室都是这么做的啊
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让复杂的事情变简单，简单的事情更简单
24楼2012-12-14 18:25:37
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czcpudai

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
sj082csh: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-04-05 14:36:00
我周围的同学有做的，目的片段是RT-PCR获得，信号肽是某一病毒信号肽，表达载体是老师馈赠。
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25楼2012-12-15 10:30:45
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shujunru

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
sj082csh: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-04-05 14:35:51
你要转到什么细胞？准备用什么表达载体？用什么筛选系统？如果这些你都不知道的话，取看看基因工程吧
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26楼2012-12-18 05:59:17
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