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求翻译SRB和MTT操作
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本人化学，为了发文章，但是生物方面的实验操作写不好，有谁写过SRB实验和MTT实验，帮我写下，包括前面如何培养细胞（发过这方面文章的应该知道滴！），下面是实验具体操作，写的连贯些，如果你曾经写过SRB和MTT，复制给我就好了，你懂滴！ A、SRB assay （1）采用细胞株：用人肝癌7721细胞； （2）将对数生长期的细胞消化后，吹打成单细胞悬液，接种于96孔培养板；5x103细胞/孔，每孔培养基200μL，370C、5% CO2培养箱中培养过夜； （3）待细胞贴壁后，加入适当浓度(100, 20, 4, 0.8, 0.16μM)的受试化合物和阳性对照药在培养箱中再培养3d； （4）10%三氯醋酸固定1h； （5）用双蒸水洗涤，干燥后，每孔加入70μL SRB溶液（4mg/mL），室温染色20min，1%醋酸洗涤，干燥； （6）每孔加入100μL 10 mM Tris-Base溶液使SRB溶解； （7）酶标仪检测各孔OD值（检测波长：515nm），记录结果，按下列公式计算抑制率：抑制率（%）=(OD对照－OD给药)/ OD对照 × 100%，并计算IC50。如果受试物的IC50小于阳性对照药物的IC50，则视为可做效果优于阳性对照药的化合物。 B、MTT assay （1）采用细胞株：人白血病HL-60细胞； （2）将对数生长期的细胞消化后，吹打成单细胞悬液，接种于96孔培养板；5x103细胞/孔，每孔培养基100μL，370C、5% CO2培养箱中培养过夜； （3）加入适当浓度(100, 20, 4, 0.8, 0.16μM)的受试化合物和阳性对照药在培养箱中再培养3d； （4）加入5 mg/mL的MTT液（20μL/孔），继续培养4h； （5）吸出孔内培养液后，加入DMSO液（100μL/孔），将培养板置于微孔板扳荡器上振荡10min，使结晶物溶解； （6）酶标仪检测各孔OD值（检测波长：570 nm）；记录结果；按下列公式计算抑制率：抑制率（%）=(OD对照－OD给药)/ OD对照 × 100%； （7）如果受试物的半数抑制浓度（IC50）小于阳性对照药，则视为可做效果优于阳性对照药的化合物。 |
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