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求动物细胞中短、中链脂肪酸的提取及测定方法
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本人想要用气相色谱测定细胞中的脂肪酸成分，所用机子型号为 angilent 7890A 柱子为HP-INNOWAX 30X0.32X0.25 升温程序如下：40° 3min, 10°/min 200° 2min, 4°/min 230° 5min. 进样量2ul 分流比 1:1，载气流速 1.8 用此方法测定乳中脂肪酸 分流比改为1:30 效果很好 想要用来分析细胞中的脂肪酸，但效果不佳 现在所用的脂肪酸提取方法主要有两种如下： 1.收集培养的细胞于10ml 玻璃离心管中，PBS清洗2遍，离心后弃上清。 2.加入氯仿甲醇溶液（1:3)悬浮细胞，密闭，超声波破碎。 3.加入遇冷的水至10ml，使溶液分层。离心，弃上层水相，重复3次。 4.用吸管吸取下层有机相至新的玻璃管中，加入无水硫酸钠脱水，离心 5.将上清液放入玻璃有机反应瓶中，并加入等体积的饱和KOH甲醇溶液，混匀，室温静置1h 6.将液体倒入玻璃离心管中，加水分层，并重复2次。取有机相至新的离心管中，脱水后上次测试。 第二种： 1. 收集细胞于玻璃离心管中，用PBS清洗2遍 2. 加入2.5% 硫酸/甲醇溶液 2ml ，与80° 进行甲酯化 1h 3. 加入2ml 饱和KCL 水溶液， 并分两次加入1ml 正己烷进行脂肪酸抽提 4. 将所得到的有机相合并约2ml， 脱水，上机。 现在测试的结果只有C14以上的脂肪酸，但我想要测定的C4-C12的脂肪酸测不出来， 可能是提取的过程中有挥发，又或者提取的回收效率不高，苦于没有更好的提取较短链脂肪酸的方法 本人新手不知道该怎么办了，文献里也没找见类似的方法。 本人已经在GC上耗费了大量的时间，无果，急切万分 不知哪位高手有过这方面的经验，恳请指教一二，不胜感激。 |
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