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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 求动物细胞中短、中链脂肪酸的提取及测定方法
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zhujiang4656

新虫 (小有名气)

[求助] 求动物细胞中短、中链脂肪酸的提取及测定方法

本人想要用气相色谱测定细胞中的脂肪酸成分，所用机子型号为 angilent 7890A    柱子为HP-INNOWAX  30X0.32X0.25

升温程序如下：40°   3min,  10°/min     200°      2min,   4°/min 230°      5min.  进样量2ul    分流比  1:1，载气流速 1.8

用此方法测定乳中脂肪酸 分流比改为1:30    效果很好



想要用来分析细胞中的脂肪酸，但效果不佳

现在所用的脂肪酸提取方法主要有两种如下：

           1.收集培养的细胞于10ml 玻璃离心管中，PBS清洗2遍，离心后弃上清。

           2.加入氯仿甲醇溶液（1:3)悬浮细胞，密闭，超声波破碎。

           3.加入遇冷的水至10ml，使溶液分层。离心，弃上层水相，重复3次。

           4.用吸管吸取下层有机相至新的玻璃管中，加入无水硫酸钠脱水，离心

           5.将上清液放入玻璃有机反应瓶中，并加入等体积的饱和KOH甲醇溶液，混匀，室温静置1h

           6.将液体倒入玻璃离心管中，加水分层，并重复2次。取有机相至新的离心管中，脱水后上次测试。

第二种：
       1. 收集细胞于玻璃离心管中，用PBS清洗2遍
       2. 加入2.5% 硫酸/甲醇溶液 2ml ，与80° 进行甲酯化 1h
           3. 加入2ml 饱和KCL 水溶液， 并分两次加入1ml 正己烷进行脂肪酸抽提
       4. 将所得到的有机相合并约2ml， 脱水，上机。

现在测试的结果只有C14以上的脂肪酸，但我想要测定的C4-C12的脂肪酸测不出来，  可能是提取的过程中有挥发，又或者提取的回收效率不高，苦于没有更好的提取较短链脂肪酸的方法

本人新手不知道该怎么办了，文献里也没找见类似的方法。

本人已经在GC上耗费了大量的时间，无果，急切万分

不知哪位高手有过这方面的经验，恳请指教一二，不胜感激。
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1楼 2012-11-28 00:33:58
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栗子味冰淇淋

新虫 (初入文坛)
请问一下离心的转速是多少？？
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2楼2015-12-25 11:26:06
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