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zitengluo

金虫 (小有名气)

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专业: 生物无机化学

[求助] 求助！比色法测甾体总皂苷的问题

做着与实验室主流方向完全不同的课题，哎，源于老板接的一个项目，现在实验室也没什么人能指导，真是可怜的孩纸
闲话少说吧，直奔主题
在做提取中草药里面的甾体总皂苷，想初步筛选条件，所以选用了比色法来测提取的甾体总皂苷，以含量较多的母体——薯蓣皂苷元作为对照物，通过这阵子查找文献，筛选方法后，选用了茴香醛-浓硫酸的显色方法，找到了1977年的源头文献，具体步骤都是按照那上面来的，挥干溶剂后加入乙酸乙酯溶解样品，再加入试剂A（0.5%的茴香醛乙酸乙酯溶液）和试剂B（浓硫酸：乙酸乙酯=1：1（v:v））各1 ml，在60 ℃温浴20 min，然后在室温冷却10 min后测定在430 nm处的吸收，以不加样品为试剂空白
现在有几个问题想请教：
首先就是这个显色反应的原理，想知道具体生成了什么，虽然有文献说是F环破裂反应，但是想知道具体的
试剂空白显红色，本身的吸收有点大，到了0.9（相对于空气）左右，虽然被扣除吸收，但是我感觉这会导致样品的吸收很大，导致结果不是很准，不是说吸光度1一下才比较准确嘛，而且我测试实际样品的时候读数不是很稳定
还有个人觉得显色反应不稳定，吸光度是一直在增加，样品和空白都颜色不断加深，有试过冰浴，但是感觉效果不明显，不知道有什么方法可以停止显色反应，让读数稳定呢？
不知道大家有什么好的建议没？有谁做过这个反应能给点指导更好啦，亲们，不要建议用色谱法之类的，我只能考虑分光光度计法，实验室条件有限
我上传原始文献给大家瞄瞄吧

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