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zxc123zxc

新虫 (小有名气)

[求助] 荧光标记的单链DNA加热到90度荧光会发生改变吗?

如题,高温影响荧光标记的单链DNA的荧光强度吗?
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chaijudi

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zxc123zxc: 金币+10, 感谢回答! 2012-11-22 15:19:00
crity328: 金币+1, 专家辛苦了,欢迎常来~ 2012-11-22 21:21:48
加热后,由于热运动加快,分子碰撞几率增大,导致荧光猝灭
2楼2012-11-22 10:36:56
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shixiaba

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
crity328: 金币+1, 感谢交流,欢迎常来~ 2012-11-22 21:22:03
zxc123zxc: 金币+10, ★★★很有帮助, 由于我是新手,好多操作方面的都不懂,谢谢你的回答哈! 2012-11-23 10:12:03
应该不会的。做光谱分析时由于要让DNA变形后重新杂交然后进行扩增,这步操作基本上都是95摄氏度二分钟然后室温放置。至少在这个时间范围内荧光是不会出问题的。
3楼2012-11-22 21:18:34
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新鲜晨曦

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zxc123zxc: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 回答得好详细啊,我这个提出问题的人思路有点不清楚,我指的就是后者,谢谢咯 2012-11-23 10:08:29
LZ的意思是在90℃下测荧光还是说加热到90℃再回复室温测荧光?
如果是后者的话,应该不会。我用FAM荧光团用之前都会加热到95℃再退火,没什么问题。
4楼2012-11-23 09:16:47
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shixiaba

至尊木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by shixiaba at 2012-11-22 21:18:34
应该不会的。做光谱分析时由于要让DNA变形后重新杂交然后进行扩增,这步操作基本上都是95摄氏度二分钟然后室温放置。至少在这个时间范围内荧光是不会出问题的。

不客气,多多交流,相互学习。
5楼2012-11-24 08:53:29
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hbhgzss

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by chaijudi at 2012-11-22 10:36:56
加热后,由于热运动加快,分子碰撞几率增大,导致荧光猝灭

请问FAM 标记DNA 具体是标记在哪个位置上呢?或者是标记在碱基中哪个位点?请不吝赐教。
过好今天,不让明天还如今天一样后悔昨天!
6楼2013-04-19 10:48:53
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chaijudi

至尊木虫 (著名写手)

应该是3“或5”端糖环的羟基上吧
7楼2013-04-19 12:59:56
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