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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 测序送样
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添翼如虎

新虫 (小有名气)

[交流] 测序送样 已有6人参与

我们已经将ＤＮＡ片段连接到Ｔ载体上，并做完克隆，请问要测插入的DNA序列是直接送菌液呢还是再用菌跑PCR的产物呢？谢谢各位关注
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1楼 2012-11-19 15:51:12
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添翼如虎

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by sxxuan at 2012-11-20 09:45:40
直接送菌液，或者是提取质粒之后送测序。如果送PCR后再测序，可能出现错配之类的，并不能100%真实反映菌液中重组质粒的序列。可以用T载体上的通用引物测序
如果为了省时间，金唯智的测序是直接用菌液测序而不是提取 ...

有的文献上说要用EcoR1酶切来确定阳性克隆，我用引物重新扩增了一下菌，还有必要做酶切吗？这个酶切是什么作用呢？
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9楼2012-11-20 10:18:48
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Renavatio

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
送菌液吧，不必要麻烦...
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Undefined！
3楼2012-11-19 21:12:05
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莲池梵音

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
当然是菌液啦。
有些情况 也需要做穿刺管
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非特约观察员
4楼2012-11-19 21:45:45
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kingleo99

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如果不考虑成本问题，那么建议送PCR产物，这样测序效果较好，如果为了省钱那就送菌液，最好不要送穿刺哪种，送液体的哪种你把EP管封好。因为送菌液他们要提取质粒往往耗时而且经常提取不到所以很耽误你的事情。送PCR产物比较好的，我的建议。你是用载体上的引物序列，建议使用P47,P48来扩增。
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科学就是发现规律，而规律是上帝创造的，认识独一上帝就是智慧。
5楼2012-11-19 21:49:15
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