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【答案】应助回帖
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yqlmshui: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢 2012-12-25 20:16:28
番茄总DNA提取[张楠,谢放.高质量加工番茄基因组DNA提取方法的改进.湖南农业科学,2011(15):16-17, 20.]
采用改进的CTAB法[105]进行提取，具体步骤如下:
①取新鲜加工番茄叶片放入已灭菌冰浴后的研钵中，小心加入液氮，迅速研成粉末，快速称取0.2g粉末，放入已加850mL CTAB提取缓冲液，6%PVP，2%β-巯基乙醇的离心管中；
②药品加入后充分混匀，65℃水浴40min，冷却至室温；
③加入等体积的Tris-平衡酚-氯仿-异戊醇（V:V:V=25:24:1），轻轻摇动混匀后，4℃、12000g离心10min；
④取上清，加入等体积的氯仿-异戊醇并加入10% 3M NaAc溶液，轻轻摇动混匀后，4℃、12000g离心10min；
⑤取上清，加入2.5倍体积的-20℃无水乙醇，冰浴1h，4℃、8000g离心5min，取沉淀；
⑥将沉淀用70%乙醇（体积分数）漂洗两次并自然�?干，视沉淀的多少加入TE缓冲溶液50-100µL中，置于4℃充分溶解，保存备用。 |
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