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123n

木虫 (正式写手)

[交流] PCR结果如图，不知道是怎么回事啊？？？？ 已有20人参与

求大侠帮忙！！！
模板没问题，水没污染！！
用pfu扩增的！！！！！

2012-11-18 1,2,3,4 pfu;50;50.jpg
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1楼 2012-11-18 10:40:37
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德国工兵铲

金虫 (小有名气)
★
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高保真酶扩增速度是很慢的，延伸时间要长点，楼主是不是没有把延伸时间调长啊
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4楼2012-11-18 22:59:25
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普通回帖

yuminzorro

木虫 (小有名气)
★
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我以前也遇到过，用LA 扩增的很好，但是换用保真性更高的酶后就糊一片。同问，帮顶！
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2楼2012-11-18 15:08:05
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will1015

木虫 (小有名气)
★
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提高退火温度再P一次试试
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3楼2012-11-18 22:48:39
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xudabin98

木虫 (正式写手)
★
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肯定是你的引物有问题！你可以选择重新合成，最好是重新设计一对来扩增。
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5楼2012-11-18 23:02:27
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wenxin0815

金虫 (著名写手)
★
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我以前也遇到过，引物或者模板的问题吧

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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Yourattitude,notyouraptitude,willdetermineyouraltitude
6楼2012-11-19 00:04:32
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xiangqianfd

铁虫 (小有名气)
★
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同样觉得引物有问题～～不过pfu我们用的经验是Tm高一些会P的比较好～
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7楼2012-11-19 00:13:22
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xjzw

新虫 (小有名气)
★
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就是最后还有8分钟的延伸嘛，你设置没有？其他援助者说你提高退火温度，你也同时试试
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8楼2012-11-19 00:17:02
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huangguoqing

木虫 (正式写手)
★
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反应条件没有摸好。建议可以提高退火温度或纯化模板。
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9楼2012-11-19 10:03:45
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jl860822

金虫 (正式写手)
★
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那你试过Taq酶吗？这是非特异性太强的表现，你提高一下退火温度吧
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10楼2012-11-19 10:56:31
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