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123n

木虫 (正式写手)

[交流] PCR结果如图,不知道是怎么回事啊???? 已有20人参与

求大侠帮忙!!!
模板没问题,水没污染!!
用pfu扩增的!!!!!

2012-11-18 1,2,3,4 pfu;50;50.jpg
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德国工兵铲

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
高保真酶扩增速度是很慢的,延伸时间要长点,楼主是不是没有把延伸时间调长啊
4楼2012-11-18 22:59:25
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普通回帖

yuminzorro

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我以前也遇到过,用LA 扩增的很好,但是换用保真性更高的酶后就糊一片。同问,帮顶!
2楼2012-11-18 15:08:05
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will1015

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
提高退火温度再P一次试试
3楼2012-11-18 22:48:39
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xudabin98

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
肯定是你的引物有问题!你可以选择重新合成,最好是重新设计一对来扩增。
5楼2012-11-18 23:02:27
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wenxin0815

金虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我以前也遇到过,引物或者模板的问题吧

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
Yourattitude,notyouraptitude,willdetermineyouraltitude
6楼2012-11-19 00:04:32
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xiangqianfd

铁虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
同样觉得引物有问题~~不过pfu我们用的经验是Tm高一些会P的比较好~
7楼2012-11-19 00:13:22
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xjzw

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
就是最后还有8分钟的延伸嘛,你设置没有?其他援助者说你提高退火温度,你也同时试试
8楼2012-11-19 00:17:02
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huangguoqing

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
反应条件没有摸好。建议可以提高退火温度或纯化模板。
9楼2012-11-19 10:03:45
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jl860822

金虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
那你试过Taq酶吗?这是非特异性太强的表现,你提高一下退火温度吧
10楼2012-11-19 10:56:31
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