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麦堂straw银虫 (小有名气)
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[求助]
酵母表达的锌离子依赖性金属蛋白酶加锌离子反而抑制酶活
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| 最近用毕赤酵母表达了一个重组蛋白酶，根据蛋白酶序列确定它为锌离子依赖性金属蛋白酶，活性位点处有两个组氨酸残基为锌离子的结合位点。可测定离子对该酶酶活影响的时候，加入1mM，5mM，10mM的Zn2+均对该酶酶活起了不同程度的抑制作用，随着Zn2+浓度的增加抑制效果逐渐增强。有一点不懂的是，既然是锌离子依赖性金属蛋白酶，活性中心有锌离子结合位点，不应该是加入了锌离子会使其测得的酶活力提高吗，有木有哪位做过相关实验的大侠知道这是为什么，还望不吝赐教，小妹不甚感激，被这个问题困扰了好久好久。。。 |
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【答案】应助回帖
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高浓度底物会抑制酶促反应。在低浓度下，酶促反应服从米氏方程。而在高浓度底物下，反应速度降低是常见的事情。原因：1.高浓度底物下会生成无效复合物；2.高浓度的底物会对于溶剂浓度产生影响引起抑制作用；3，极高浓度的底物会降低水的浓度，从而使酶促反应引起抑制；4.高浓度的底物带有高浓度的杂质，可能作为混合型或者反竞争性抑制剂而起作用，抑制酶促反应的速度。 金属酶的金属离子有些可能是作为底物而起作用，比如一些激酶的镁离子，大多数还是作为激活剂，但是高浓度底物会抑制酶促反应的机理对于高浓度的激活剂也同样抑制酶促反应的原理大同小异。 另外，金属离子对于酶蛋白的折叠状态会有影响，过高浓度时可能引起酶蛋白重折叠。 |
2楼2013-05-26 17:09:23