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现在需要分离纯化一个蛋白容易c端降解，不知道选择什么介质，大家可以给点建议
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现在需要分离纯化一个蛋白，它的等电点大概为5.5左右。 这个蛋白很容易c端降解。 希望大家帮忙建议下应该选用什么介质，纯化的时候流动相里添加什么试剂加以保护，尽量减少或者避免c端降解。 |
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duhaili
铁虫 (小有名气)
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2楼2012-11-20 15:24:27
【答案】应助回帖
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听不到: 金币+2, 应助指数+1, 鼓励新虫参与交流，欢迎常来分析版~ 2012-12-11 13:05:20
wight3: 金币+2, ★有帮助, 加入EDTA没有效果，刚刚破碎完过强阴Q无法挂柱 2012-12-13 10:27:27
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wight3: 金币+2, ★有帮助, 加入EDTA没有效果，刚刚破碎完过强阴Q无法挂柱 2012-12-13 10:27:27
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首先查文献确定是何种酶在降解你的蛋白，如果未知的话在纯化前建议加入EDTA、PMSF等常用的蛋白酶抑制剂（注意PMSF在水溶液中半衰期只有十几分钟，需要多次添加）。 对于纯化，既然你已经知道了蛋白等电点，就可以尝试离子交换柱了。比如你的蛋白pI为5.5，建议尝试阴离子交换柱（初步纯化用强阴离子交换柱，后期精分可以用弱阴离子交换柱）。如果lz样品杂蛋白过多，可以先用分子筛分批收集组分。（对于介质，可以查GE公司的产品目录） |
3楼2012-12-11 13:01:57