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zuolili213

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 为什么挑取单菌落

在做转化试验或者是涂平板时，为什么必需从长出的菌中挑取单菌落，若挑取的不是单菌落对试验有何影响？我不太明白，请大家帮忙指点！谢谢了！
[search]挑取单菌落[/search]
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坚持就是胜利！
1楼 2007-07-04 11:04:02
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沙砾

只有挑单克隆摇菌才能保证你的菌液是纯的啊
提出来的质粒才纯撒
要不后来进行pcr与酶切鉴定时会因菌液不纯而出现杂带的！！
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2楼2007-07-04 11:18:34
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hotdunk

金虫 (正式写手)
★
johnsooh(金币+1):谢谢前来交流....
单菌落是由一个菌体分裂产生的，菌落内的所有菌体几乎一样，都包含有转化进去的目标质粒，所以才能在平板筛选压力下生长。假如在操作过程中混杂入污染的杂菌或者转化入其他质粒（比如使用的器材污染等）也可能会在平板上意外生长，若将其和期望的重组子一起挑出来的话，最后将得不到质粒或者得到的质粒是不纯的，所以这也是抽出来的质粒还要鉴定的原因。
我也是新手，自己的理解~希望各位前辈多多指教~
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爱情来得快去得也快，只有猪肉卷是永恒的！
3楼2007-07-04 14:28:43
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zuolili213

铁杆木虫 (正式写手)
明白了，谢谢高手的指点！以后还请各位多多帮忙！
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坚持就是胜利！
4楼2007-07-06 07:54:05
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jiliu1036

新虫 (初入文坛)
★
johnsooh(金币+1):thank u !
筛选出来的菌落不可能是百分百纯的,所以分别挑单克隆然后再鉴定.而且在摇菌的过程中需要保种.鉴定无误的话,保种的就可以用于以后的扩增.
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5楼2007-07-08 09:04:04
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badyy0202

金虫 (小有名气)
★
johnsooh(金币+1):谢谢交流@!
有时候因为人为操作失误，也会导致挑的不是单菌落
一般我们用酶切进行验证质粒。如果不是单菌落的话，酶切图谱上可以很容易就看出来的。这个时候你需要把原来保存的挑菌发酵的菌种重新划单菌落去进行纯化。
我觉得就是影响实验进度吧，对实验本身的结果没有什么大影响
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6楼2007-07-08 13:37:54
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