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[求助]
色谱法测定多巴、多巴醌、多巴色素含量
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想要精确测定混合溶液的多巴、多巴色素、多巴醌等物质的含量，液相色谱、气相色谱法、反相液相等，有哪位高手做过相关的东西或者是有相关资料啊，恳求赐教啊，本人新虫，金币少，求照顾 |
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@多巴胺
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【答案】应助回帖
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ilx323: 金币+1, ★★★很有帮助, 谢谢哦 2012-11-14 13:10:36
ilx323: 金币+1, ★★★很有帮助, 谢谢哦 2012-11-14 13:10:36
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2 实验方法 2.2.1 标准曲线的制备与线性范围的测定 准确量取适量甲砜霉素标准贮备液，用流动相稀释成浓度分别为0.02 μg/ml、0.05 μg/ml、0.125 μg/ml、0.25 μg/ml、0.5 μg/ml的对照溶液，供高效液相色谱分析。每个浓度重复3次，以添加浓度为横坐标，对应的峰面积平均值为纵坐标绘制工作曲线，经过线性回归得到回归方程和相关系数。 2.2.2 方法的精密度和准确度测定 取均质后的空白样品，作为空白试料，在空白样品中添加4 μg/L、10 μg/L、25 μg/L这三种浓度，作为添加试料，按照上述每个浓度测3个样品，每个样品重复进样5次，求出日内变异系数，该试验连续做5天，求出日间变异系数，根据实际回收剂量计算回收率。准确度用回收率来评价，根据变异系数评价方法的精密度。 回收率=回收后的药物浓度/添加的药物浓度 变异系数（CV %）=S/ ×100 % 其中， 2.2.3方法的灵敏度测定 取甲砜霉素标准贮备液，用流动相稀释成系列浓度，每个浓度测定5次，连续重复5批，记录所以的信号强度S与背景信号强度N，以样品检测的信噪比（S/N）为3和10的浓度分别作为检测限和定量限。按照2.2.4的样品前处理方法和2.2.5的色谱条件分析样品，每个浓度设5个重复，连续重复操作5批，最后按要求算出最低定量限和最低检测限。 2.2.4 待测样品的前处理方法 2.2.4.1供试样品 2.2.4.2 提取 称取5±0.05 g空白添加试样于50 ml离心管中，加20 ml乙酸乙酯，振荡提取10 min,4000 r/min离心5 min.取上清液于鸡心瓶中，再用20 ml乙酸乙酯提取一次。合并两次提取液，45 ℃旋转减压蒸发至尽干。加5 ml水于鸡心瓶中超声5 min使充分溶解，转至50 ml离心管中。再加5 ml水于鸡心瓶中重复溶解后转至同一离心管中。加20 ml正己烷，振荡5 min，4000 r/min离心2 min,取下层液备用。 2.2.4.3 净化 C18柱依次用乙腈、水各5 ml活化。取备用液过柱，挤干。用5 ml乙腈洗脱。洗脱液于45 ℃用氮气吹干，残留物用1.0 ml流动相溶解，过滤，供高效液相色谱测定分析。 2.2.5 抽检样品中甲砜霉素的检测 2.2.5.1 色谱条件 色谱柱：C18 250 mm×4.6 mm(i.d)，粒径5 μm； 流动相：乙腈+水（20+80，v/v），试样前经微孔滤膜过滤，超声； 流速：1.0 ml/min； 检测波长：225 nm； 柱温：室温； 进样量：20 μl。 2.2.5.2 测定 取适量试样溶液和相应的标准工作液，作单点或多点校准，以色谱峰的面积分值定量，标准工作液及试样液中的甲砜霉素响应值均在一起检测的线性范围内。在上述的色谱条件下，甲砜霉素的保留时间在15 min左右，标准溶液和试样溶液的液相色谱图见图5，图6。 |
6楼2012-11-14 08:42:56
2楼2012-11-13 10:24:28
3楼2012-11-13 11:03:52
4楼2012-11-13 11:09:13