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liu58yeying金虫 (小有名气)
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[求助]
做标曲时怎样加入内标和对照品
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请问大家一个基础的问题。我做空表血浆的标曲，先在EP管里加入了定量的内标和对照品，将它们浓缩干，然后在加入血清，混匀，这样可以吗？因为我的样品极性偏小，我担心样品一直粘在EP管壁上，没有和蛋白充分结合，这就和in vivo的情况有差距了，不是吗？ 还有我一直担心一个问题，就是如果我不浓缩干，而是在200 ul 血清中加入流动相溶解的对照品和内标，流动相体积会不会对回收率有大的影响，10 ul的甲醇加进去会不会偏大了？谢谢大家帮忙。 |
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liuzhaomin
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【答案】应助回帖
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liu58yeying: 金币+20, ★★★很有帮助, 谢谢你的解答 2012-11-09 20:55:05
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可以按照原来的方法，将样品溶剂挥干后加入空白血清，然后再处理，一般来讲，化合物都会与蛋白结合的，蛋白与化合物之间的作用力应该是远远大于化合物与EP管之间的。 如果是不挥干，直接往血清中加入含溶剂的化合物标准品，那么将来在处理体内的样品时，同样要先加入与之前溶解样品相同体积的空白溶剂，然后再进行处理。 建立方法，最好考察一下绝对回收率，就是用处理好的样品信号响应除以相同浓度未处理的甲醇溶解的样品的信号响应。 |
2楼2012-11-09 20:21:57
zlfok00
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3楼2012-11-09 20:53:03