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绿草如茵木虫 (小有名气)
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[求助]
求10mg/mL鲑鱼精的配制方法
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大家好，本人要做原位杂交，需要配制10mg/mL鲑鱼精，求配制方法！ 我见的方法是：5．10mg/ml变性鲱鱼精子DNA 1). 称取鲑鱼精DNA 2 g置于500 ml烧杯中，加入约200 ml的TE Buffer。 2). 用磁力搅拌器室温搅拌2～4小时，溶解后加入4 ml的5 M NaCl， 使其终浓度为0.1 M。 3). 用苯酚和苯酚/氯仿各抽提1次。 4). 回收水相溶液后，使用17号皮下注射针头快速吸打溶液约20 次，以切断DNA。 5). 加入2倍体积的预冷乙醇进行乙醇沉淀。 6). 离心回收DNA后，溶解于100 ml的去离子水中，测定溶液的 OD260值。 7). 计算溶液的DNA浓度后，稀释DNA溶液至10 mg/ml。 8). 煮沸10分钟后，分装成小份(1 ml/份)。-20℃保存。 9). 使用前在沸水浴中加热5分钟后，迅速冰浴冷却 请问这里的苯酚和苯酚/氯仿各是什么要求？苯酚是酸性酚还是碱性酚？苯酚/氯仿又怎么配制？急急急！请求高手指导，不胜感激！ |
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2楼2022-03-16 10:35:05