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【答案】应助回帖
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zhoupeng87: 金币+5, 应助指数+1, 欢迎交流 2013-07-15 07:51:35
zhoupeng87: FC-EPI+1 2013-07-15 07:51:44
Q1. 需要确定石蜡是否进入到了木材的细胞壁中.
A1. 听起来象是做显微镜石蜡切片标本. 建议参考一下植物显微镜切片标本制做的书籍. 这才是关键中的关键, 因为您提出的问题这些写书的老前辈全都遇过.
木材为极性材料，石蜡为非极性材料。有人推荐用两种荧光剂染色，一种极性荧光剂，一种非极性荧光剂。
Q2. 请教那些是极性荧光剂，哪些是非极性荧光剂。哪些算极性染料，哪些算非极性染料？
A2. 这样说好了, 杯子里装了无色透明的水与煤油, 加一点荧光染料下去搅拌. 会让杯底水层呈现荧光的就是极性荧光染料象是荧光黄(Fluorescein)黄绿色荧光, 罗丹明(Rhodamine)粉红~黄色荧光, 会让杯面油层呈现荧光的就是非极性荧光染料象是蒽（anthracene）蓝荧光, 香豆素(Coumarin)蓝荧光, 芘（pyrene)
Q3. 我一下子用两种染料上去，对木材和石蜡分别染色，然后浸注石蜡入木材，这样可以吗？
A3. 染色是为了判断切片组织断面的极性分布. 所以最好是在石蜡化完成之后, 把木材样本切片短暂的浸泡在中等极性染浴 (e.g. 70% 丙酮:芘（pyrene), 30%水:荧光黄(Fluorescein))三十秒, 然后用70%酒精漂洗 3~5秒*3次把多余染剂洗去, 然后拿到荧光显微镜底下照相判读影像. 预期的结果是木材细胞壁呈红黄色, 石蜡呈蓝色. 没有荧光显微镜的话就用普通光学显微镜吧, 预期的结果是木材细胞壁呈粉红色, 石蜡呈无色.
P.S.1如果没有荧光显微镜, 那么也不一定非要使用非极性荧光染料, 很多分散染料都是非极性的, 不妨考虑看看.
P.S.2 生物有个体差异, 所以生物实验的不确定性颇大. 这代表每次实验需要正面对照组(positive control) -- 细胞壁经过苯甲酰氯酯化变成非极性表面, 负面对照组(negative control)细胞壁经过漂白水氧化变成极性表面, 未处理组(un-treated), 处理组(treated)
这可能是个有趣的计划, 祝您好运. |
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