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新虫 (小有名气)

[求助] 基因克隆

童鞋们:
  我想克隆一个来源于酿酒酵母的基因在毕赤酵母中表达,我在NCBI上找到了这个基因的CDS序列,设计了引物,现在提了酵母基因组DNA,准备以DNA为模版PCR。但是,我同学说要提RNA,合成cDNA,以CDNA为模版PCR,请问我该采取哪种方法呢?有知道的童鞋指导指导下哈,真心感谢了O(∩_∩)O~
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每一个让你讨厌的现在,都有一个不努力的曾经。
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zhlf1989513

金虫 (小有名气)

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感谢参与,应助指数 +1
两种方法都行,但是我们一般做细胞实验就是提RNA在逆转录为cDNA,在以cDNA为模板PCR,像菌液的话我们一般提基因组DNA的。。。
keepon
2楼2012-11-08 16:40:54
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电电的开始

银虫 (小有名气)

理论上二者都可以,看看哪种成功率高些吧!

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
为自己而开始
3楼2012-11-08 20:38:11
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小萍

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
克隆基因的试剂盒一般都是用RNA来反转成cDNA做模板的哦,不过对RNA的要求比较高,如果能用DNA能做的话,估计会简单一些。
富非所望不忧贫...
4楼2012-11-08 21:45:55
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liujianmin68

木虫 (职业作家)

努力发展交叉学科

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-09 14:11:37
酵母菌是真核生物,很多基因是有内含子的,如果你克隆的基因含有内含子,那么用DNA进行基因克隆的结果是也含有内含子的,含有内含子的基因在另外的物种或菌株中很难表达。所以,你还是提RNA做实验吧。
转向地质微生物学
5楼2012-11-09 07:04:07
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