24小时热门版块排行榜    

查看: 414  |  回复: 3

lvtd

金虫 (小有名气)

[求助] 酶切

本人用EcoR1和BamH1双酶切,每次都得到一条带,他们俩的酶切温度不一样,我不管用哪个的温度切都是一条带,怎么办?有谁切过,给点指导啊!酶是宝生物的。
回复此楼
tobeornottobe,thisisaquestion!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
没说清楚你切的是什么,没办法给你分析。还有就是限制性内切酶虽然有其最适温度,但在很大温度范围都是有作用的,只是活性不是100%。
2楼2012-11-06 10:53:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

vpz2007

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lvtd: 金币+2, 有帮助, 谢谢!我试试。 2012-11-12 10:47:53
宝生物推荐的那个应用最佳酶切用Kbuffer应该可以切开,BamH1在37℃切,不会影响活性,别切太长时间就行。再不行可以分步酶切试试呗,先切一个酶,胶回收或者醇沉了再切一个。
可以接受失败,但不能失去再次站起来的勇气
3楼2012-11-06 14:46:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangwenxia16

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


lvtd: 金币+1, 有帮助, 我37度切过了,没切出来。酶切物不到1ug 2012-11-12 10:48:49
在37度就可以了,不用分两次切,酶切物不要超过酶切体系的1/3,EcoR1和BamH1加样量:如100ul总酶切体系,则各加2~3ul。酶切1~2hr
4楼2012-11-09 13:37:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lvtd 的主题更新
信息提示
请填处理意见