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芒辰

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[求助] 同时转118KD 45KD 20KD 求最佳分离胶浓度

因为蛋白样品太少也很难获得想在一块胶上跑118KD 45KD 以及20KD的蛋白
求最佳分离胶浓度 12%的胶能跑118KD的么？
另外求转膜条件（恒流转）

谢谢！

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1楼 2012-11-04 21:42:43

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cicelyzh

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【答案】应助回帖

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感谢参与，应助指数 +1
芒辰: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-11-05 07:12:06

12%的胶可以跑118kD蛋白，但那个区域的分离效果不是很好。如果你想对118, 45, 20kD的蛋白都得到好的分离效果，最好用梯度胶，建议上8-15%。
转膜你是用湿法还是半干法转移呢？不管什么方法，大蛋白和疏水蛋白转得比小分子的亲水蛋白慢。如果想完全转好118kD的蛋白，最好多转些时间。如果是湿法，建议400mA, 2小时以上。就我个人经验，即使转3小时也没有把蛋白转过、转丢的情况。

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2楼2012-11-05 01:03:12

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芒辰

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引用回帖:

2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-05 01:03:12
12%的胶可以跑118kD蛋白，但那个区域的分离效果不是很好。如果你想对118, 45, 20kD的蛋白都得到好的分离效果，最好用梯度胶，建议上8-15%。
转膜你是用湿法还是半干法转移呢？不管什么方法，大蛋白和疏水蛋白转得比 ...

谢谢！我们用半干转主要是怕118转好的时候20的就转过了 = =

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3楼2012-11-05 07:13:06

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