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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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xulu2008

金虫 (正式写手)

[求助] 质粒连接

我在纯化目的基因和载体时最后一步洗脱用的是超纯水(ph7。0-8.5)后直接连接,会不会影响连接?连接要用到无核酸酶的水。
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huangguoqing

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励因子 2012-11-02 13:46:28
小丹木木: 操作失误,鼓励应助 2012-11-02 13:46:43
个人意见,仅供参考!
理论上来说,试剂盒里面配备的elution buffer里面含有EDTA,Tris等物质,会影响酶的效应。一般测序的时候会告诉你胶回收或质粒回收的产物是最好不要用Elution buffer的。我认为连接的时候使用超纯水溶解的目的基因会更有益于DNA连接酶的连接反应。
2楼2012-11-02 09:55:19
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竹子小小

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
都可以,目前两种都用,没大差别。反正我们连接了就转大肠,菌只要有一个是对的就行了。
3楼2012-11-02 10:19:19
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阿留申

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

个人认为是没什么影响,我以前两种都用过,没出现过问题。
4楼2012-11-05 11:43:19
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200509757

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

没有什么影响的;连接的关键是酶切位点的选择、酶切效果、连接酶以及连接时间,同时转化时的感受态细胞。
5楼2012-11-05 14:29:53
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