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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 脂质体转染后多长时间加放线菌酮检测蛋白半衰期合适？
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子曰包子好吃

银虫 (小有名气)

[求助] 脂质体转染后多长时间加放线菌酮检测蛋白半衰期合适？

脂质体转染后多长时间加放线菌酮检测蛋白半衰期合适？
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1楼 2012-10-31 20:29:33
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张力民

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
wizardfan: 金币+2, 鼓励热心回答 2012-11-02 07:55:22
子曰包子好吃: 金币+5, 谢谢了 2012-11-02 15:18:23
引用回帖:
3楼: Originally posted by 子曰包子好吃 at 2012-11-01 15:23:01
我是转染后，检测某个内源蛋白的半衰期...

我觉得至少要保证两点：1.各组转染效率要一致。2.先查一下文献看看这个蛋白的半衰期大概多长，这样好确定加CHX作用的时间。
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4楼2012-11-01 20:49:32
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张力民

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
子曰包子好吃: 金币+5, 感谢提供经验 2012-11-01 15:24:14
你是外源转染质粒后检测外源蛋白的半衰期吗？我觉得检测内源蛋白结果更可信一些，外源转染不好控制各组的转染量保持一致。如果由于实验条件限制必须外源转染的话，转然后24小时即可检测，当然最好做个预实验，看转然后多长时间蛋白开始表达。个人经验，仅供参考。
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2楼2012-10-31 22:19:44
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子曰包子好吃

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 张力民 at 2012-10-31 22:19:44
你是外源转染质粒后检测外源蛋白的半衰期吗？我觉得检测内源蛋白结果更可信一些，外源转染不好控制各组的转染量保持一致。如果由于实验条件限制必须外源转染的话，转然后24小时即可检测，当然最好做个预实验，看转然 ...

我是转染后，检测某个内源蛋白的半衰期
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3楼2012-11-01 15:23:01
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五羊齐天

金虫 (小有名气)

研究僧
引用回帖:
4楼: Originally posted by 张力民 at 2012-11-01 20:49:32
我觉得至少要保证两点：1.各组转染效率要一致。2.先查一下文献看看这个蛋白的半衰期大概多长，这样好确定加CHX作用的时间。...

麻烦问一下，细胞中加入放线菌酮后收获提蛋白的时候裂解液里面还用加蛋白酶体抑制剂来抑制蛋白质降解了吗？多谢！

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5楼2017-03-13 22:39:44
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