24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 1581  |  回复: 12
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

淘气维尼89

木虫 (小有名气)

[求助] RT-PCR求助

最近在做RT-PCR,使用的材料是实验室自己诱导培养的植物愈伤组织,提取RNA之后,逆转录合成cDNA,以此为模板进行PCR。扩增过500bp左右的基因,以及1500bp左右的基因,都没有扩出来条带。将cDNA稀释10倍后,500bp的基因片段扩出来了,但是空白对照也有条带。并且带孔不干净,感觉有东西没跑出来似的。请大家帮帮忙分析一下问题出在哪,别的老师说问题可能有两个方面:一是RNA质量不好。二是选择的细胞不好,有退化,所以大片段就扩不出来

这是1500bp的基因,没有目的条带



这是500bp的基因,有目的条带,最右边是空白对照
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

caoxin1984

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-10-31 15:20:23
淘气维尼89: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-11-01 16:07:24
1500bp的没有条带,建议
1. 在NCBI验证一下引物是否正确,是否是你要P的目的基因
2. 选择一个阳标,即确定该基因表达的组织

500bp虽然P出来了,但是条带很弱,建议
1. 加大每孔上样量
2. 改变EB或GelRed等的浓度

空白条带有显示,一般是因为加样污染导致,建议每次加样时更换枪头,最好用带滤芯的枪头

祝好运!
3楼2012-10-30 19:49:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 学员dDLvoQ 的主题更新
信息提示
请填处理意见