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淘气维尼89

木虫 (小有名气)

[求助] RT-PCR求助

最近在做RT-PCR,使用的材料是实验室自己诱导培养的植物愈伤组织,提取RNA之后,逆转录合成cDNA,以此为模板进行PCR。扩增过500bp左右的基因,以及1500bp左右的基因,都没有扩出来条带。将cDNA稀释10倍后,500bp的基因片段扩出来了,但是空白对照也有条带。并且带孔不干净,感觉有东西没跑出来似的。请大家帮帮忙分析一下问题出在哪,别的老师说问题可能有两个方面:一是RNA质量不好。二是选择的细胞不好,有退化,所以大片段就扩不出来

这是1500bp的基因,没有目的条带



这是500bp的基因,有目的条带,最右边是空白对照
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david1008gao

银虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
先用cDNA做模板扩一下ACTIN看看吧 ,循环数不要太高。
6楼2012-10-30 23:18:14
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