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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 线虫同期化处理
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多比tang

新虫 (初入文坛)

[求助] 线虫同期化处理 已有2人参与

开始做秀丽隐杆线虫实验，同期化处理是按照文献上来的，可是处理后的线虫不是死了就是根本长不到L4期，不知道是怎么了？有木有做过此类实验的同学呀，帮帮忙！
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1楼 2012-10-26 10:06:38
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

fayzhao

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2012-12-02 09:18:36
裂解浓度不要太高了，不然对卵也会有影响的。裂解之后，有虫卵和虫体，用60%蔗糖悬浮。
加入60%蔗糖，3500rpm离心5min,卵就会浮在上层，吸取上层虫卵即可。
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6楼2012-11-29 11:04:41
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变心的翅膀

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我也在做此实验，不过我郁闷的不是虫子死了，而是每次都延迟爬出，跟预算的时间根本不吻合！
个人推测你的原因是裂解时间过长，导致卵受影响，或者是裂解后清洗的不彻底，使碱液残留，对幼虫生长产生了影响。
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男儿当自强
2楼2012-11-04 14:55:54
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多比tang

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 变心的翅膀 at 2012-11-04 14:55:54
我也在做此实验，不过我郁闷的不是虫子死了，而是每次都延迟爬出，跟预算的时间根本不吻合！
个人推测你的原因是裂解时间过长，导致卵受影响，或者是裂解后清洗的不彻底，使碱液残留，对幼虫生长产生了影响。

想问一句，裂解完了之后，离心，取的是下层的虫卵么？
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3楼2012-11-08 17:40:42
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变心的翅膀

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

是的，取下层卵孵育即可
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男儿当自强
4楼2012-11-11 19:13:54
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多比tang

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 变心的翅膀 at 2012-11-11 19:13:54
是的，取下层卵孵育即可

下层不只有虫卵，还有很多死了的虫体，不知道怎样将二者分开？
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5楼2012-11-12 14:48:56
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elric

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2012-12-02 09:18:58
我们实验室是直接买超市的JAVEL次氯酸钠消毒液（没有注意是多少浓度，国内的话直接用八四消毒液就好，我回头看下浓度）,配上10M的NaOH，再加上去离子水，体积配比为2.5:0.5:7。如果bleach同步化一个板子只需要10ml就可以，如果4个板子最好用40ml，工作时间为4min，不超过5min.基本上离心后看不出来虫体的，全是eggs。放一晚上20度摇床，就孵化了。线虫不长到L4，有可能是Cholesterol浓度不够
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7楼2012-12-02 03:31:25
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周大熊

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by fayzhao at 2012-11-29 11:04:41
裂解浓度不要太高了，不然对卵也会有影响的。裂解之后，有虫卵和虫体，用60%蔗糖悬浮。
加入60%蔗糖，3500rpm离心5min,卵就会浮在上层，吸取上层虫卵即可。

吸取上层虫卵之后，要用M9在清洗一下吗
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8楼2013-07-16 10:17:10
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周大熊

铁虫 (小有名气)
裂解时候你用多少转？
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9楼2013-07-16 10:19:45
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fayzhao

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 周大熊 at 2013-07-16 10:17:10
吸取上层虫卵之后，要用M9在清洗一下吗...

是的，需要清洗三次
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10楼2013-07-16 20:30:47
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