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cqwenyan

金虫 (小有名气)

[求助] 请问怎么把pdm4转入s17-1啊，我做了5次了

我的pdm4有一万多bp，氯霉素抗性。想转进s17-1，热激转化了五次，都没有成功。和我出一组的师兄转了一个8000bp的质粒进去，一个板长了8个。是感受态效率不行么？我想用电击转化，但是大师姐说这样做不好，我查了一些文献也没弄懂为啥。哎~有什么办法和窍门，请大家帮帮忙啊。

[ Last edited by cqwenyan on 2012-10-25 at 11:44 ]
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梦想成真
1楼 2012-10-25 11:38:00
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weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-26 20:32:59
cqwenyan: 金币+2, ★★★很有帮助, 偶，谢谢 2012-10-26 23:49:38
你这个明显是转化效率不行啊~楼主可以考虑把S17-1制备化学感受态来做转化~
顺便提一句，电转液没啥问题啊~你转化之后再提质粒验证就行了~我做的时候几十kb的质粒都是电转的
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2楼2012-10-25 11:58:42
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wchaos

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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cqwenyan: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢 2012-10-26 23:50:09
用电转。电转后以你最快的速度加培养液，每过30秒细胞死一半。
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3楼2012-10-25 13:52:02
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shiwenjing12

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-26 20:33:12
cqwenyan: 金币+1, ★有帮助, 谢谢 2012-10-26 23:50:27
可以用电转方案进行转化，电转时一定要先确定所用的电转液是没任何问题的，同时要注意电转参数的设计，电转后一定要立即加入保护液，以防菌体在电转损伤下死掉。
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4楼2012-10-26 12:59:48
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小小cool

金虫 (正式写手)
化学转化法就可以啊，这个是序列http://www.miaolingbio.com/cn/product/plasmid/948.html
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5楼2015-05-15 16:55:57
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