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minmin-911铜虫 (小有名气)
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[求助]
HPLC 用C18反相柱鉴定蛋白纯度，蛋白峰与溶剂峰混在一起怎么办？
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HPLC条件： HPLC柱子：C18, 4.6 mm × 250 mm, 300 Å 洗脱液A [0.1% 三氟乙酸水溶液] 洗脱液 B (0.1% 三氟乙酸乙腈溶液) 30min 线性洗脱 100%A 5%B 到70%A 30%B 流速为 1.0 ml/min 检测波长为：280 nm 目标蛋白分子量为25KDa, pI为5左右。 如图所示，是不是我的目标蛋白的极性太强，导致与溶剂峰出峰太早，我可以用甲醇替代乙腈，乙酸替换三氟乙酸吗？或者怎样调节我的流动相与洗脱条件，让我的目的蛋白出峰晚些？在样品中添加多少浓度的盐溶液，是否也可以让出峰晚些？  1.jpg  2.jpg |
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