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castlered

木虫 (小有名气)

[求助] 问问细胞粘附的问题

HT-29细胞,细菌粘附3h之后PBS一洗就全脱落了,脱落的干干净净啊之前发生过这样的情况,换了新的培养基之后好了,现在又出现了,培养基也换了,还不行,有人遇到过这样的情况么?实验反复了好多次,快要崩溃了。。。。
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天崖过客

铁虫 (初入文坛)

这个不明白,友情帮楼主定下,期待高人解惑
我的免费资源共享http://60de.com/
2楼2012-10-08 10:19:06
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piaoyingaza

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
castlered: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-10-08 15:13:29
yqbter: 金币+1, 鼓励发帖! 2012-10-09 07:56:05
可能的原因很多,培养及成分不对,细胞代数过大,状态不好,等等
3楼2012-10-08 13:41:52
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sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
HT-29本身就很容易脱落的,贴壁不牢,我试过用PBS也能冲下来,都不用胰酶消化。
我一般都不敢用PBS洗涤,换液的话直接吸掉废液直接加新鲜培养基
不过楼主要用药物处理就麻烦了,多贴壁一会行不行呀?我没做过药物处理,不懂~
你的日子如何,你的力量也必如何!
4楼2012-10-08 16:10:13
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yangjjie

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
castlered: 金币+5, ★★★很有帮助, 下次再不行可以试下这个 2012-10-08 21:25:57
如果让细胞自然贴服很难,而且你还有清洗过程,所以就需要加入粘附剂。一般培养神经元实验中可加入多聚赖氨酸,起到粘附的作用。
5楼2012-10-08 17:09:51
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yangjjie

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


wizardfan: 金币+1, 鼓励发帖交流 2012-10-09 06:49:33
加入多聚赖氨酸后,即便加入胰酶,蛋白酶消化、清洗,细胞都不会轻易脱落。
6楼2012-10-08 17:11:02
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castlered

木虫 (小有名气)

wizardfan: 有什么步骤不一样而导致成功的吗? 2012-10-09 06:49:22
引用回帖:
4楼: Originally posted by sxxuan at 2012-10-08 16:10:13
HT-29本身就很容易脱落的,贴壁不牢,我试过用PBS也能冲下来,都不用胰酶消化。
我一般都不敢用PBS洗涤,换液的话直接吸掉废液直接加新鲜培养基
不过楼主要用药物处理就麻烦了,多贴壁一会行不行呀?我没做过药物 ...

我的不是做药物处理,就是细菌粘附,然后涂板计数的
平时培养的时候贴壁还是挺牢的呢,今天又实验了一次,成功了,木有脱落。。。
7楼2012-10-08 21:25:26
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