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artificial mirRNA(人工mirRNA)载体构建问题
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| 本人最近打算做artificial mirRNA(amirRNA)来敲除一种植物体内的基因，看了一些文献，其载体构建的主要流程是：1）根据靶基因设计amirRNA;2)克隆内源的mirRNA前体；3）采用重叠PCR并以内源mirRNA前体为骨架构建amirRNA;4)将amirRNA克隆岛相应的载体上。现在我的问题是：第一步根据靶基因设计amirRNA, 看到的很多文献都是利用网站web mirRNA designer，上面可以设计拟南芥、水稻等多种序列已经释放的植物，可是我现在所做的这个植物基因组目前还没有测序，序列都是未知的，那我要怎样设计我要做的基因amirRNA片段呢？虽然我看到有不少设计时的要求及原则，可是要怎样来从一个序列中挑选呢？有没有一些软件可以用？请高人指点，谢谢~~~~ |
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