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beishui

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用什么酶,条件是?
宠辱不惊,看庭前花开花落;去留无意,望天上云卷云舒。
11楼2012-09-27 15:30:29
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路程

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by chenguestc at 2012-09-27 15:05:48
(1)说明里面有多个酶切位点,酶切时间2个小时或更长时间没有影响,没有酶切位点是切不开的。
(2)你的内切酶有污染,其他人操作的时候把其他酶污染到你用的酶里了。

多谢
12楼2012-09-28 13:23:33
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路程

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
11楼: Originally posted by beishui at 2012-09-27 15:30:29
用什么酶,条件是?

按照说明书来的,同时做的对照组质粒酶切结果正常
13楼2012-09-28 13:24:56
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sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-28 14:49:50
之前碰到同样的问题,换一管酶就正常了
如果楼主是这样的情况,可以换新的内切酶,或者换两种内切酶切别的位点,看看能不能切下正常的条带。
有时候质粒质量不高或浓度不够也会如此
你的日子如何,你的力量也必如何!
14楼2012-09-28 14:11:22
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路程

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
14楼: Originally posted by sxxuan at 2012-09-28 14:11:22
之前碰到同样的问题,换一管酶就正常了
如果楼主是这样的情况,可以换新的内切酶,或者换两种内切酶切别的位点,看看能不能切下正常的条带。
有时候质粒质量不高或浓度不够也会如此

多谢,已经用多种酶切过都是这个现象
15楼2012-09-28 22:51:24
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beishui

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

多做几个对照,想质粒的,以及用其他的酶去切一下,另外就是电泳缓冲液换一下,电泳槽洗一下。泡泡看看,一般情况下不是载体的问题就是电泳环境的问题了
宠辱不惊,看庭前花开花落;去留无意,望天上云卷云舒。
16楼2012-09-29 09:31:24
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潮汐过后

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

可以考虑一下宿主,一些宿主菌提质粒时要用去蛋白液去除蛋白,不然残留的核酸酶在37℃酶切时会把质粒消化掉。
17楼2012-09-29 09:49:16
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