【答案】应助回帖

宠辱不惊，看庭前花开花落；去留无意，望天上云卷云舒。

11楼2012-09-27 15:30:29

路程

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 260.5
红花: 1
帖子: 35
在线: 34.9小时
虫号: 2017135
注册: 2012-09-20
专业: 生物大分子结构与功能

引用回帖:

10楼: Originally posted by chenguestc at 2012-09-27 15:05:48
（1）说明里面有多个酶切位点，酶切时间2个小时或更长时间没有影响，没有酶切位点是切不开的。
（2）你的内切酶有污染，其他人操作的时候把其他酶污染到你用的酶里了。

多谢

12楼2012-09-28 13:23:33

路程

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 260.5
红花: 1
帖子: 35
在线: 34.9小时
虫号: 2017135
注册: 2012-09-20
专业: 生物大分子结构与功能

引用回帖:

11楼: Originally posted by beishui at 2012-09-27 15:30:29
用什么酶，条件是？

按照说明书来的，同时做的对照组质粒酶切结果正常

13楼2012-09-28 13:24:56

sxxuan

金虫 (著名写手)

MolEPI: 4
应助: 107 (高中生)
金币: 3442.4
散金: 104
红花: 17
帖子: 1478
在线: 266.1小时
虫号: 512865
注册: 2008-02-27
性别: MM
专业: 生物化学

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-28 14:49:50

之前碰到同样的问题，换一管酶就正常了
如果楼主是这样的情况，可以换新的内切酶，或者换两种内切酶切别的位点，看看能不能切下正常的条带。
有时候质粒质量不高或浓度不够也会如此

你的日子如何，你的力量也必如何！

14楼2012-09-28 14:11:22

路程

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 260.5
红花: 1
帖子: 35
在线: 34.9小时
虫号: 2017135
注册: 2012-09-20
专业: 生物大分子结构与功能

引用回帖:

14楼: Originally posted by sxxuan at 2012-09-28 14:11:22
之前碰到同样的问题，换一管酶就正常了
如果楼主是这样的情况，可以换新的内切酶，或者换两种内切酶切别的位点，看看能不能切下正常的条带。
有时候质粒质量不高或浓度不够也会如此

多谢，已经用多种酶切过都是这个现象

15楼2012-09-28 22:51:24

beishui

金虫 (小有名气)

应助: 15 (小学生)
金币: 1270.9
帖子: 105
在线: 115.6小时
虫号: 577053
注册: 2008-06-22
性别: GG
专业: 生物物理、生物化学与分子

【答案】应助回帖

多做几个对照，想质粒的，以及用其他的酶去切一下，另外就是电泳缓冲液换一下，电泳槽洗一下。泡泡看看，一般情况下不是载体的问题就是电泳环境的问题了

宠辱不惊，看庭前花开花落；去留无意，望天上云卷云舒。

16楼2012-09-29 09:31:24

潮汐过后

铜虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 158.3
红花: 1
帖子: 223
在线: 67.6小时
虫号: 2035567
注册: 2012-09-28
专业: 抗体工程学

【答案】应助回帖

可以考虑一下宿主，一些宿主菌提质粒时要用去蛋白液去除蛋白，不然残留的核酸酶在37℃酶切时会把质粒消化掉。

17楼2012-09-29 09:49:16