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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒酶切之后电泳呈弥散状是什么原因
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beishui

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用什么酶，条件是？
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宠辱不惊，看庭前花开花落；去留无意，望天上云卷云舒。
11楼2012-09-27 15:30:29
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路程

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by chenguestc at 2012-09-27 15:05:48
（1）说明里面有多个酶切位点，酶切时间2个小时或更长时间没有影响，没有酶切位点是切不开的。
（2）你的内切酶有污染，其他人操作的时候把其他酶污染到你用的酶里了。

多谢
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12楼2012-09-28 13:23:33
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路程

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by beishui at 2012-09-27 15:30:29
用什么酶，条件是？

按照说明书来的，同时做的对照组质粒酶切结果正常
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13楼2012-09-28 13:24:56
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sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-28 14:49:50
之前碰到同样的问题，换一管酶就正常了
如果楼主是这样的情况，可以换新的内切酶，或者换两种内切酶切别的位点，看看能不能切下正常的条带。
有时候质粒质量不高或浓度不够也会如此
赞一下 回复此楼
你的日子如何，你的力量也必如何！
14楼2012-09-28 14:11:22
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路程

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by sxxuan at 2012-09-28 14:11:22
之前碰到同样的问题，换一管酶就正常了
如果楼主是这样的情况，可以换新的内切酶，或者换两种内切酶切别的位点，看看能不能切下正常的条带。
有时候质粒质量不高或浓度不够也会如此

多谢，已经用多种酶切过都是这个现象
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15楼2012-09-28 22:51:24
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beishui

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

多做几个对照，想质粒的，以及用其他的酶去切一下，另外就是电泳缓冲液换一下，电泳槽洗一下。泡泡看看，一般情况下不是载体的问题就是电泳环境的问题了
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宠辱不惊，看庭前花开花落；去留无意，望天上云卷云舒。
16楼2012-09-29 09:31:24
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潮汐过后

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

可以考虑一下宿主，一些宿主菌提质粒时要用去蛋白液去除蛋白，不然残留的核酸酶在37℃酶切时会把质粒消化掉。
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17楼2012-09-29 09:49:16
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