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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 关于毕赤酵母菌悬液的诱变！！！
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集气瓶

铁虫 (小有名气)

[求助] 关于毕赤酵母菌悬液的诱变！！！

现在我们在做常压室温等离子体对毕赤酵母的致死率实验，我们是取的160rpm摇床培养24h的后的菌液实验，等离子体处理完之后放入28℃恒温培养箱中培养72h，结果只有少部分平板长出菌落（0s对照组也是长出少量），我们分析的原因是：1、摇床培养时间过短；2、冷藏的毕赤酵母变红色，可能菌落老化；3、毕赤酵母不叫容易沉淀，梯度稀释过程中稀释液上部菌数较少。不知道有没有做过毕赤酵母的时间，到底是什么原因呢？？？
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永远的阿森纳！
1楼2012-09-21 10:21:59
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集气瓶

铁虫 (小有名气)
补充一下，培养一天和两天的菌液里面等看到很明显的絮状物质，只要从摇床里拿出来静止10min就会沉淀，感觉像菌株都聚集在了一起沉淀了，有大神遇到过这种情况吗？？？
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永远的阿森纳！
3楼2012-09-22 09:13:29
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+3, MicEPI+1, good 2012-09-22 16:13:50
对于你的情况，说下个人见解：
毕赤酵母的培养过程中出现絮凝情况是比较常见的，在遇到这种情况时，可以漩涡剧烈震荡混匀分散，然后进行后续试验。
冷藏的毕赤酵母接种活化，在160rpm培养24h，时间不算长，培养到对数期约需36h左右，这个时候菌的活力最好，适宜后续试验。
毕赤酵母的平板培养，一般在30度温箱。直接挑菌划线，平板大约培养24h足矣。菌液涂板一般36-48h；转化涂板无抗性板约需36h-48h；涂抗性板约48h（-60h）。重要基因敲除菌约需培养72-96h。你培养72h后菌落数量仍比较少应该不会再长了。
冷藏的毕赤酵母变红色，在我的实验中出现过一次，最后确定是染菌了。
毕赤酵母比较容易沉淀，那你再稀释的时候应该漩涡振荡或移液枪混匀后再稀释进行后续实验。

总结以上情况，个人认为有2个原因：
一是，你的菌活化摇床培养时间短，菌没有生长到稳定期，菌的活力不够稳定。鉴于你的实验，我认为应该培养至稳定期，并维持3-4h，确保所有的菌都已进入稳定期，那么你后续实验中菌才是完全相同的。
二是，你在去活化菌液稀释涂板时，应该混匀后再去菌液稀释进行后续实验，不应该只取基本沉淀后的上清少量菌液进行稀释涂板。

仅供参考，多多交流。
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4楼2012-09-22 11:45:43
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han_0532

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般说来24小时后酵母应该到对数期末期吧。你看看72小时是不是培养时间过久了？从酿酒酵母的角度分析，没有做过毕赤酵母。
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5楼2012-09-22 15:46:44
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