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TTC测根系活力的实验中，为什么要制作标准曲线
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大家好，我要测的是鬼针草的根系活力，我看到实验指导书上写着，测根系活力有一个定量测定，还有一个定性测定。 想请问一下，定性测定需要做吗？ 定量测定中，为什么要制作标准曲线啊？不是已经有一个结果计算的公式了吗？为什么要另外做的？ 感谢大家的帮忙! 以下是实验步骤 三、实验步骤 1. 定性测定 （1）配制反应液 把1％ TTC溶液、0.4 mol／L的琥珀酸和磷酸缓冲液按1:5:4比例混合。 （2）把根仔细洗净，把地上部分从茎基部切除。将根放入三角瓶中，倒入反应液，以浸没根为度，置37℃左右暗处放1～3 h，以观察着色情况，新根尖端几毫米以及细侧根都明显地变成红色，表明该处有脱氢酶存在。 2. 定量测定 （1）TTC标准曲线的制作 取0.4％ TTC溶液0.2 mL放入大试管中，加9.8 mL乙酸乙酯，再加少许Na2S2O4粉末摇匀，则立即产生红色的TTF。此溶液浓度为每毫升含有TTF 80 µg。分别取此溶液0.25 mL、0.50 mL、1.00 mL、1.50 mL、2.00 mL置10 mL刻度试管中，用乙酸乙酯定容至刻度，即得到含TTF 20 µg、40 µg、80 µg、120 µg、160 µg的系列标准溶液，以乙酸乙酯作参比，在485 nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。 （2）称取根尖样品0.5 g，放入小烧杯中，加入0.4％ TTC溶液和磷酸缓冲液（pH7.0）各5 mL，使根充分浸没在溶液内，在37℃下暗保温1～2 h，此后立即加入1 mol/L硫酸2 mL，以停止反应。（与此同时做一空白实验，先加硫酸，再加根样品，37℃下暗保温后不加硫酸，其溶液浓度、操作步骤同上）。 （3）把根取出，用滤纸吸干水分，放入研钵中，加乙酸乙酯3～4 mL，充分研磨，以提出TTF。把红色提取液移入刻度试管，并用少量乙酸乙酯把残渣洗涤2～3次，皆移入刻度试管，最后加乙酸乙酯使总量为10 mL，用分光光度计在波长485 nm下比色，以空白试验作参比测出吸光度，查标准曲线，即可求出TTC还原量。 四、结果计算 根系活力= C/(1000*W*h) [mg TTF/（g•h）] 式中：C——四氮唑还原量，μg。 W——根重，g。 h——时间，h。 |
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