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TTC测根系活力的实验中,为什么要制作标准曲线
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大家好,我要测的是鬼针草的根系活力,我看到实验指导书上写着,测根系活力有一个定量测定,还有一个定性测定。 想请问一下,定性测定需要做吗? 定量测定中,为什么要制作标准曲线啊?不是已经有一个结果计算的公式了吗?为什么要另外做的? 感谢大家的帮忙! 以下是实验步骤 三、实验步骤 1. 定性测定 (1)配制反应液 把1% TTC溶液、0.4 mol/L的琥珀酸和磷酸缓冲液按1:5:4比例混合。 (2)把根仔细洗净,把地上部分从茎基部切除。将根放入三角瓶中,倒入反应液,以浸没根为度,置37℃左右暗处放1~3 h,以观察着色情况,新根尖端几毫米以及细侧根都明显地变成红色,表明该处有脱氢酶存在。 2. 定量测定 (1)TTC标准曲线的制作 取0.4% TTC溶液0.2 mL放入大试管中,加9.8 mL乙酸乙酯,再加少许Na2S2O4粉末摇匀,则立即产生红色的TTF。此溶液浓度为每毫升含有TTF 80 µg。分别取此溶液0.25 mL、0.50 mL、1.00 mL、1.50 mL、2.00 mL置10 mL刻度试管中,用乙酸乙酯定容至刻度,即得到含TTF 20 µg、40 µg、80 µg、120 µg、160 µg的系列标准溶液,以乙酸乙酯作参比,在485 nm波长下测定吸光度,绘制标准曲线。 (2)称取根尖样品0.5 g,放入小烧杯中,加入0.4% TTC溶液和磷酸缓冲液(pH7.0)各5 mL,使根充分浸没在溶液内,在37℃下暗保温1~2 h,此后立即加入1 mol/L硫酸2 mL,以停止反应。(与此同时做一空白实验,先加硫酸,再加根样品,37℃下暗保温后不加硫酸,其溶液浓度、操作步骤同上)。 (3)把根取出,用滤纸吸干水分,放入研钵中,加乙酸乙酯3~4 mL,充分研磨,以提出TTF。把红色提取液移入刻度试管,并用少量乙酸乙酯把残渣洗涤2~3次,皆移入刻度试管,最后加乙酸乙酯使总量为10 mL,用分光光度计在波长485 nm下比色,以空白试验作参比测出吸光度,查标准曲线,即可求出TTC还原量。 四、结果计算 根系活力= C/(1000*W*h) [mg TTF/(g•h)] 式中:C——四氮唑还原量,μg。 W——根重,g。 h——时间,h。 |
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