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yujiajia

铁虫 (初入文坛)

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大家好,我现在在做酶切,用的载体是PMDT-19T Simple版的,载体片段大概2700bp,而我的目的片段是2301bp,怎样在电泳中分开啊?有人遇到过类似的情况吗?
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rockyss

金虫 (小有名气)

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先将电压调低一些,时间长一点,用较长的制备胶跑一下,看看能不能分开,如果不行就要分两次(第一次尽量富集片断蛋白),然后纯化后再跑一次,提高片断蛋白纯度满足试验需要就行了,希望帮到你

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2楼2012-09-15 19:08:38
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yujiajia

铁虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by rockyss at 2012-09-15 19:08:38
先将电压调低一些,时间长一点,用较长的制备胶跑一下,看看能不能分开,如果不行就要分两次(第一次尽量富集片断蛋白),然后纯化后再跑一次,提高片断蛋白纯度满足试验需要就行了,希望帮到你

我用百分之一的胶,百分之1.5的胶,百分之2的胶都试过了,可是两个带就是跑不开。你说的那个是不是把跑出来的这两个混在一起的片段再回收,回收后再跑吗?我后面还要把目的片段回收连到诱饵载体上。
坚持
3楼2012-09-15 21:30:57
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rockyss

金虫 (小有名气)

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★ ★ ★ ★
yujiajia: 金币+4, ★★★很有帮助 2012-09-16 00:43:06
引用回帖:
3楼: Originally posted by yujiajia at 2012-09-15 21:30:57
我用百分之一的胶,百分之1.5的胶,百分之2的胶都试过了,可是两个带就是跑不开。你说的那个是不是把跑出来的这两个混在一起的片段再回收,回收后再跑吗?我后面还要把目的片段回收连到诱饵载体上。...

是的,如果你最终是要回收目的片断(不要载体那部分),那么第一次跑完,尽量切靠近片断蛋白的部分,然后再跑一次看看。
4楼2012-09-15 23:22:54
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yujiajia

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by rockyss at 2012-09-15 23:22:54
是的,如果你最终是要回收目的片断(不要载体那部分),那么第一次跑完,尽量切靠近片断蛋白的部分,然后再跑一次看看。...

那我试试看,非常谢谢你奥
坚持
5楼2012-09-16 00:43:40
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