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求助：知道肽的分子量和大致等电点，怎么选择层析材料？
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如题：知道想要纯化的肽的分子量（＜10KDa）,等电点大约为7.6左右。 如何选择分子筛层析的填料、上样量和洗脱液的浓度以及PH值？ 万分感谢 |
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anyaxiong
铁杆木虫 (知名作家)
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+4, 鼓励应助 2012-09-13 14:31:16
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小丹木木: 金币+4, 鼓励应助 2012-09-13 14:31:16
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1，先根据分子量设计：如果你的肽是球形的，可以考虑用Sephadex G-25来除去分子量小于5000（这个不是很精确）；如果不是球形，那就不适用了。除去大分子，选Sephadex G-50就可以。缓冲液选常用的PBS就好，中性，20mM磷酸钠盐外加150mM氯化钠。 2，在根据其等电点设计：因其等电点在7.6左右，可以考虑用阳离子交换柱，至于用强阳离子还是弱阳离子，这个视实验情况而定。对强阳离子而言，初始洗脱液浓度大概50mM，pH≤6.5都可以，切记pH 间隔必须大于1，不然无法与柱料很好的结合；弱阳离子交换剂情况比较复杂，在此不作讨论，望楼主看看理论知识。 |
2楼2012-09-13 10:53:49
3楼2012-09-15 13:31:15
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