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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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jackiehyz

银虫 (小有名气)

[求助] 蛋白质提取

各位有没有做酶活性测定工作的？
关于测酶活前，蛋白质提取的问题，大家都是用什么方法提取的？有用试剂盒提取的吗，如果有，什么公司的试剂盒效果较好呢？
对于单细胞生物，是否只要使细胞破碎了，就可以进行酶活的测定？
超声波破碎对单细胞生物蛋白质是否有破坏作用，从而影响后续酶的活性？
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1楼 2012-09-10 18:19:25
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碧波泅客

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-09-14 16:25:31
这就要看你的酶是胞内酶还是胞外酶了，胞外酶离心培养液取上清就可分离，胞内酶需要破碎细胞。破碎细胞方法很多，有机械破碎法、物理破碎法、化学破碎法、酶促破碎法等。你说的超声波破碎是会影响酶活的，不建议使用。推荐使用温和的机械破碎法或者是反复冻融法。
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2楼2012-09-14 10:09:56
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jackiehyz

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 碧波泅客 at 2012-09-14 10:09:56
这就要看你的酶是胞内酶还是胞外酶了，胞外酶离心培养液取上清就可分离，胞内酶需要破碎细胞。破碎细胞方法很多，有机械破碎法、物理破碎法、化学破碎法、酶促破碎法等。你说的超声波破碎是会影响酶活的，不建议使用 ...

单细胞生物的酶应该是属于胞内酶吧，请问如果用提蛋白的试剂盒提取后续测酶活，效果如何呢？
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一个人如果完全按照自己的内心活着，要么成为一个疯子，要么成就一个传奇
3楼2012-09-14 20:27:08
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碧波泅客

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
jackiehyz: 金币+5, ★有帮助, 谢谢！回复晚了，很不好意思~~ 2012-10-26 16:39:20
多数试剂盒提取蛋白属于酶促破碎法，一般试剂盒都附带蛋白酶抑制剂混合物，阻止蛋白酶对蛋白（目的酶）的降解。效果比机械破碎法好，价格方面贵点。可以仔细阅读下试剂盒说明书或咨询卖家了解具体情况，希望对你的实验有帮助。
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4楼2012-09-15 09:10:29
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