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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 哺乳动物钙离子浓度的测定
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wmqouc

金虫 (著名写手)

[求助] 哺乳动物钙离子浓度的测定

各位大侠：
大家好！
我最近想做哺乳动物细胞加入激动剂后钙离子的变化？
请问荧光酶标仪（MD，SpectraMax M2）能做吗？
看文献看到共聚焦能做，但共聚焦看到是细胞的光学切片单层啊,大家是怎样测得呢？
请各位给予指点，谢谢！
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宁静致远
1楼 2012-09-06 10:25:04
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jqscdw

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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yqbter: 金币+2, 鼓励发帖！ 2012-09-06 10:55:13
wmqouc: 金币+1, 谢谢 2012-09-06 11:03:03
没有完全高清楼主的问题，钙离子的变化可以用流式细胞仪测定，你说的哺乳动物细胞，不知道是体外培养的还是活体实验。体外培养的很好测，如果是活体实验就要把组织制备成单细胞然后测定了。
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天行健君子自强不息
2楼2012-09-06 10:46:37
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wmqouc

金虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jqscdw at 2012-09-06 10:46:37
没有完全高清楼主的问题，钙离子的变化可以用流式细胞仪测定，你说的哺乳动物细胞，不知道是体外培养的还是活体实验。体外培养的很好测，如果是活体实验就要把组织制备成单细胞然后测定了。

谢谢你的回复，我做的是转染的293细胞系，加入激动剂后看细胞内钙离子流的变化
你说体外培养的好测
我们没有流式细胞仪，
有荧光酶标仪（MD，SpectraMax M2）和共聚焦显微镜
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宁静致远
3楼2012-09-06 11:02:38
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匿名

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★
感谢参与，应助指数 +1
wmqouc: 金币+1 2012-09-07 17:32:03
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4楼2012-09-06 20:10:01
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wmqouc

金虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 逐玉 at 2012-09-06 20:10:01
荧光染料比如fluo3结合共聚焦显微镜能观察细胞内钙离子浓度的变化。
具体可以参考王春梅的《激光扫描共聚焦显微镜技术》

谢谢！我已经给你发了短消息
可否加你QQ？
王春梅的《激光扫描共聚焦显微镜技术》是你之前传给我的，我看了，
谢谢。
我想用酶标仪测一下，因为酶标仪能量化给出数据，共聚焦是不是不好定量啊？
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宁静致远
5楼2012-09-07 17:38:22
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匿名

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6楼2012-09-07 21:39:51
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匿名

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7楼2012-09-08 07:38:22
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wmqouc

金虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 逐玉 at 2012-09-08 07:38:22
前两张图片是用荧光染料Fluo3对HEK293胞内钙离子染色，利用莱卡sp5激光共聚焦显微镜扫描加入氯化锰得到的前后的荧光变化。最后一张图片是用显微镜自带的软件处理后的结果。从此图中可以看出，荧光强度是可以进行量化 ...

谢谢回复！
请问Series015_t00.jpg是诱导之前的吗？
Series015_t59.jpg是诱导之后的吗？
怎么诱导之后变浅了？？？
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宁静致远
8楼2012-09-11 16:06:48
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wmqouc

金虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 逐玉 at 2012-09-07 21:39:51
共聚焦当然能定量。
荧光强度可以用共聚焦所带的软件进行分析的。能够给出具体的数据的。
你们那儿用的是什么牌子的共聚焦呢？...

我这的共聚焦是nikon的。
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宁静致远
9楼2012-09-11 16:09:41
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匿名

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10楼2012-09-12 06:43:04
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