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yujiajia

铁虫 (初入文坛)

[求助] sfil酶切

有人用过sfil这个酶吗?我做的是双酶切,分别用的是bamh1和sfil酶,一个37度,一个50度,在做分步酶切,sfil这个酶一般切多长时间呢?有人用这个酶切过吗?
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你用的是哪个公司的酶,你可以去公司主页查看,一般会有每个酶建议用的buffer和酶切时间!
持之以恒、永不放弃!
2楼2012-09-06 10:02:58
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yujiajia

铁虫 (初入文坛)

我用的是Fermentas公司的酶
坚持
3楼2012-09-08 00:01:06
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无疆@行者

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这需要你去看公司说明,时间是可以根据你的酶量调节,多加点可以快一点,查一下酶的切割效率
4楼2012-09-08 00:52:21
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yujiajia

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 无疆@行者 at 2012-09-08 00:52:21
这需要你去看公司说明,时间是可以根据你的酶量调节,多加点可以快一点,查一下酶的切割效率

谢谢
坚持
5楼2012-09-08 20:53:08
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-10 13:41:06
yujiajia: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-09-14 20:23:32
我用的都是NEB的酶。以前Fermentas要的时间太久,有时候甚至要过夜酶切。现在都改用NEB的,效果非常好。一般的验证切半小时就足够了。要回收的切一个半小时到两小时足够。
但是BamH I的效率稍低,一般四小时足矣。不同温度的话,先低温4小时,然后高温1-2小时就足够了。仅供参考。
6楼2012-09-09 19:49:17
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xl0071334

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-09-10 13:41:21
sfil这个酶需要两个识别位点才能达到比较好的效果,而且两个识别位点至少要相距170bp。两个识别位点可以位于同一DNA分子或者不同DNA分子
7楼2012-09-09 20:34:53
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yujiajia

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by xl0071334 at 2012-09-09 20:34:53
sfil这个酶需要两个识别位点才能达到比较好的效果,而且两个识别位点至少要相距170bp。两个识别位点可以位于同一DNA分子或者不同DNA分子

我是在引物上直接加的酶切位点。一个是不是效率很低啊?
坚持
8楼2012-09-14 20:26:07
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