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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请问pEGFP-N1这个载体转化DH5能不能看到GFP的表达？
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emma立夏

铁虫 (初入文坛)

[求助] 请问pEGFP-N1这个载体转化DH5能不能看到GFP的表达？

请问，pEGFP这个质粒能不能在原核菌里表达出GFP蛋白呢？
还是一定要转化真核才能见到gfp发绿光吗？
在真核转化的时候，有没有人用过酵母转化试剂盒呢？
谢谢大家！请有相关经验的伙伴们能提供宝贵的建议！！！！
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1楼 2012-09-05 15:14:58
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huguangdong

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
emma立夏: 金币+8, ★★★很有帮助, 谢谢你的帮助 2012-09-05 17:03:55
pEGFP转化原核菌无法看到绿色荧光，因为该载体为真核表达载体，EGFP基因前启动子为真核启动子，无法在原核系统中起作用，因而EGFP是不会表达的，酵母中应该可以，相关试剂盒咨询试剂生产商，个人认为该载体最好转染293等模式细胞系来观察荧光，效果最好，但是不知道楼主的实验目的是什么。
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2楼2012-09-05 15:25:58
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不能！原核和真核要分开！
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emma立夏
生物化学与分子生物学
3楼2012-09-05 15:59:04
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emma立夏

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by huguangdong at 2012-09-05 15:25:58
pEGFP转化原核菌无法看到绿色荧光，因为该载体为真核表达载体，EGFP基因前启动子为真核启动子，无法在原核系统中起作用，因而EGFP是不会表达的，酵母中应该可以，相关试剂盒咨询试剂生产商，个人认为该载体最好转染 ...

目的是想要用GFP作为报告基因来检测某个基因的表达量的。我用的AH109酵母，转化了好久都没有做出来了，很郁闷，想着用试剂盒了，但是是市面上的试剂盒不知道哪个好呢。。。。
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4楼2012-09-05 17:06:06
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emma立夏

铁虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by lidonghong at 2012-09-05 15:59:04
不能！原核和真核要分开！

谢谢
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5楼2012-09-05 17:06:35
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”
你可以转化模式植物的，如烟草什么的，转化后用荧光显微镜看！
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持之以恒、永不放弃！
6楼2012-09-05 18:14:16
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lidonghong

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by emma立夏 at 2012-09-05 17:06:35
谢谢

客气
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生物化学与分子生物学
7楼2012-09-06 08:07:47
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