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野麦子

新虫 (初入文坛)

[交流] WB条带 已有3人参与

一块胶上上样8个泳道，压出来的片子只有2个泳道显影，而且条带很弱。求教：如何使所有泳道都能显影，提高一抗浓度？或者延长一抗孵育时间？  
一抗在四度最多可以孵育多少个小时？
   谢谢指教！
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好好学习，天天向上
1楼 2012-08-09 20:43:11
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robert-RBT

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-08-10 13:42:19
如果样品本身浓度差异不大，8个泳道只有2个有带，可能是目的蛋白本身量的差异造成的。我做WB，一般是一抗孵育结合过夜。一抗的浓度使用，我一般是按照推荐浓度范围的中间值使用。
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2楼2012-08-09 21:12:26
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zhqu1234

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
1.在背景影响不大的情况下，尽可能的提高抗体浓度。
2.显影液、曝光时间都加倍。
3.加大上样量。
4.一般4度过夜是一抗孵育最佳效果，我感觉延长孵育时间意义不大。
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3楼2012-08-10 15:33:12
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xiwenhui

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你也可以ECL显色啊！
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4楼2012-08-11 17:01:36
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