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bisimai1025铜虫 (初入文坛)
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序列拼接
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| 各位前辈，我有两段需要拼接的序列，但是这两段拼接序列之间有20左右的碱基无法衔接，请问有没有可以不用另设计引物在重新测序的方法啊 |
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bisimai10252楼2012-08-01 14:07:23
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3楼2012-08-01 16:11:10
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【答案】应助回帖
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| 可以查看分析酶切位点。如果有合适的酶切位点话，可以用前一序列的上游引物和后一序列的下游引物PCR得到全长，然后酶切，回收包括目的序列在内的片段，克隆到载体上测序。如果没有合适酶切位点，只有合成引物在继续克隆测序了。 |
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4楼2012-08-01 21:03:02
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【答案】应助回帖
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bisimai1025: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-08-02 10:35:08
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同意。有些测序公司可以合成序列，有时候也会先拼成两段序列，再用酶切位点连接两个序列。 但如果没有，只能重新合成引物了。而且觉得在不合成引物里面纠结的话，这些时间都可以用来合成了。 楼主是用几对引物拼接的？如果那二十多bp无法拼接的话，可以尝试把片段拆分，例如本来是一对的，拆分为两对或三条引物。有时候GC含量太高，会让序列无法拼接，拆分后可能会好点。 |
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6楼2012-08-02 09:57:50
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