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cpuyao木虫 (小有名气)
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[求助]
大鼠心肌梗死区和非梗死区冻存后如何区分？？？
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请教各位虫友一个问题：药物预防大鼠心肌梗死实验，模型是结扎左前降支，动物实验结束后，大鼠完整心脏直接冻在-80°冰箱了，没有分离梗死区和非梗死区。现在下一步要做蛋白质组学，整个完整心脏匀浆不太现实，因为梗死区面积相对于非梗死区要少很多，可能关键蛋白信号会淹没，看文献说要提前分开梗死区组织的，我们什么都没有分离，取完整个心脏就冻在冰箱里了，解冻估计也看不清了吧？要怎么办才好呢，希望有知道的虫友提提宝贵意见~多谢了！！！ 1. 肉眼上怎么剥离梗死区，尤其是冰冻后的组织，有人说用激光显微切割，有的说肉眼可观察。。。。。解冻了分离对结果有很大影响吧？ 2.有做过心梗蛋白质组学的嘛？一般是取得哪部分组织提取蛋白的？对照用的什么？ 3.是谁不是右心室直接扔掉不用了？ 4.没有用液氮速冻再转存-80°，是不是对组织有影响呢？ 问题较多，希望大家随便说，我广泛接受意见~谢谢，谢谢啦~ |
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cpuyao
木虫 (小有名气)
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2楼2012-07-31 15:39:07
3楼2012-09-09 15:58:11
【答案】应助回帖
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cpuyao: 金币+20, ★★★很有帮助, 谢谢，染色后的组织貌似不能做蛋白质组了吧。。。。 2012-09-20 16:56:19
cpuyao: 金币+20, ★★★很有帮助, 谢谢，染色后的组织貌似不能做蛋白质组了吧。。。。 2012-09-20 16:56:19
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1、应该是要染色进行区分的，根据梗死区和非梗死区的颜色不同进行区分。 2、做蛋白组学的时候用的是左心室的组织，对照组（取决于你的实验安排），一般是假手术组，就是只是进行开胸但是不接扎的组。当然也可以直接用正常的心脏。 3、右心室要看你的实验需求，要是进行切片观察的话，还是建议你保留下来，毕竟完整的心脏的图片才有说服力。 4、如果是做分子生物学方面的实验，我们一般是直接放到液氮里保存，但是如果是做病例切片染色的话，还要用氯化钾来处理一下，保持心脏维持在舒张的状态，这样切片会比较好看！ 都是自己的一点经验，希望能对你有所帮助！ |
4楼2012-09-20 13:50:51
5楼2012-09-20 22:12:53