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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 为什么1ml全血分离出的血浆还不足0.3ml？
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summer2771

木虫 (正式写手)

[求助] 为什么1ml全血分离出的血浆还不足0.3ml？

如题，我用的小鼠，摘眼球取血一般都超过了1ml，总共有13只老鼠，有6只拿来分离了血清，7只拿来分离血浆。用的是购买的抗凝管和促凝管分别 分离血浆和血清。取血清是3000转离心10min，取血浆是4摄氏度3000转离心10min。
因为人手不够，所以所有的血样都是等到所有老鼠组织取完后离心的，第一个血样距离心有2个小时多点。血清取的挺好的，都是0.5-0.6ml左右。而血浆则只一般只有0.2-0.3ml左右，不知道是为什么？理论上不也应该跟血清一样达到0.5左右么？
师弟之前没分离过血浆，后来我才注意到他接完血液后他并没有摇晃混匀，而是直接室温放置的。最后离心前发现所有血样中有的已经凝固了，我们又用混匀器振荡了一会，才离心的（取血后直接放在混匀器上混匀不自己摇晃，抗凝会好点么？）。
请问，是否与如下因素有关？
1. 血样没有混匀，有的血样凝固了；2. 放置时间太长； 3. 放置温度过高，应该冰盒暂存？ 4. 粘到了小鼠眼周毛或胡须溶血了？ 5. 离心的转速和时间不够？
我在园子里搜索过找不到结论，请血液版的专业战友能够不吝赐教！谢谢！！
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1楼2012-07-26 02:07:49
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summer2771

木虫 (正式写手)
感谢楼上各位战友的帮助，今天我用同样的管子取血分离血清，在过程中尽量注意了如下事项：
1.尽量多取血，小鼠最多的取到了2毫升；
2.取血后轻轻摇晃混匀，避免血液凝固；
3.尽量尽快离心，不能保证血样离心的衔接则放置4度冰箱暂存然后离心。
最终分离出来的血浆全部在0.5ml以上，满足了我实验的需要。
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9楼2012-07-28 22:35:42
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xyz7819227

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
summer2771: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2012-08-09 11:06:04
并非所有的血浆都跟血清一样有0.5ml，另外离心的时候肯定不能让血液凝固了啊，取完血液后要加3.2%或者3.8%的柠檬酸钠，然后离心得到的血浆-60度保存
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海纳百川，有容乃大
2楼2012-07-26 11:27:41
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
第一次见到用振荡器的
楼主你确定你明白血浆和血清的关系以及分离方法吗？
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3楼2012-07-26 13:43:12
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gungunak47

铁虫 (初入文坛)
做植物研究的 表示 楼主太残忍了
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4楼2012-07-26 15:03:04
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gy313wyn

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
第四个可能性比较小吧，我觉得是放置时间长了，一般室温放置半小时就应该去离心了，一般3500~4000 10min 也不排除你买的管子质量有问题，一般最好自己配比较放心。
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5楼2012-07-26 19:37:29
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summer2771

木虫 (正式写手)
谢谢楼上各位战友的指点！
个人认为最可能有两个原因;
1.发生了溶血，因为不可避免的血液会粘到老鼠眼周的毛发；
2.放置时间过长而且没有混匀血样，结果导致上层部分血液凝固，从而影响了血浆的分离。
至于是不是管子的问题，这个我倒真不知道了...国产的管子，但是我想也不至于这十几个管子都不行吧！？
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6楼2012-07-26 22:32:36
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summer2771

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by silicare at 2012-07-26 13:43:12
第一次见到用振荡器的
楼主你确定你明白血浆和血清的关系以及分离方法吗？

呵呵，这是师弟他们弄的，我当时在摘眼球，不知道他们怎么整的，后来才跟我说。因为我的血样分离血清的多，只有少数几个是分离血浆，他们也是第一次弄，所以难免会出现问题。
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7楼2012-07-26 22:34:19
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xll8380

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
时间放置过长，这样血液容易凝固。
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8楼2012-07-27 09:35:24
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632295417

木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by summer2771 at 2012-07-28 22:35:42
感谢楼上各位战友的帮助，今天我用同样的管子取血分离血清，在过程中尽量注意了如下事项：
1.尽量多取血，小鼠最多的取到了2毫升；
2.取血后轻轻摇晃混匀，避免血液凝固；
3.尽量尽快离心，不能保证血样离心的衔 ...

请问怎么能取到2mL呢，我小鼠摘眼球，取1ml都挺费劲的，有什么技巧吗
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坚强勇敢的活着
10楼2013-09-13 21:09:06
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