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憨憨可爱多

木虫 (正式写手)

[求助] 染色体核型分析

为什么做染色体核型分析时,根尖用酸和缓冲液泡过之后切下来酶解的时候成黑色了呢?
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


憨憨可爱多: 金币+1, 谢谢,试试 2012-09-07 15:13:03
处理的步骤太多了我觉得,8-羟基喹啉或许有问题,参加文献:8-羟基喹啉诱导蚕豆根尖细胞异常性的研究。我常用的步骤如下,楼主可以用少量根尖试一下看。
1,剪根后,直接将根尖放入装纯净水(最好别用自来水,偏酸或偏碱,市场卖的大桶纯净水就可以)小玻璃瓶中(跟手指差不多大小的玻璃瓶,每瓶不要放太多根尖,3-5根即可),盖上盖子。放入冰水混合物里处理20-24小时。
2,取出后,倒掉瓶子里的水,把水控干净,加入固定液室温固定1天。
3,把根尖取出用酸解离或者用酶酶解后压片。
7楼2012-08-29 20:32:00
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普通回帖

憨憨可爱多

木虫 (正式写手)

染色体核型分析时候,油镜下看的染色体比较短小,差不多都快成一个点了,怎么才能使染色体比较粗,又比较长啊,至少能看见着丝点啊,
2楼2012-08-27 08:48:14
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

在不同的透射光下颜色是不一样的,在普通显微镜下因为光透过,有染色体部分光无法透过所以显示为黑色。
3楼2012-08-27 09:59:21
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憨憨可爱多

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by chenguestc at 2012-08-27 09:59:21
在不同的透射光下颜色是不一样的,在普通显微镜下因为光透过,有染色体部分光无法透过所以显示为黑色。

只是在前面预处理的时候用酸泡了,没有镜检,根被泡黑掉了
4楼2012-08-28 16:25:23
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

你的前处理是怎么处理的啊?从剪根到镜检是怎么处理的?一般不会泡黑了的情况啊
5楼2012-08-28 19:33:54
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憨憨可爱多

木虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by chenguestc at 2012-08-28 19:33:54
你的前处理是怎么处理的啊?从剪根到镜检是怎么处理的?一般不会泡黑了的情况啊

剪下根尖用8-羟基喹啉处理,然后用固定液固定,固定完浸泡在70%酒精中,制片的时候取出,水浸泡,酸解10min,然后再用水浸泡,然后缓冲液浸泡10分钟,最后酶解,在酶解之前取出根尖的时候就根冠部分有黑了
6楼2012-08-29 16:29:55
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憨憨可爱多

木虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by chenguestc at 2012-08-29 20:32:00
处理的步骤太多了我觉得,8-羟基喹啉或许有问题,参加文献:8-羟基喹啉诱导蚕豆根尖细胞异常性的研究。我常用的步骤如下,楼主可以用少量根尖试一下看。
1,剪根后,直接将根尖放入装纯净水(最好别用自来水,偏酸 ...

老师说是目前最好的方法了,我做的材料根尖超级小,比头发丝也大不了多少,难搞啊
8楼2012-09-07 15:15:49
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皮皮5230

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 憨憨可爱多 at 2012-08-29 16:29:55
剪下根尖用8-羟基喹啉处理,然后用固定液固定,固定完浸泡在70%酒精中,制片的时候取出,水浸泡,酸解10min,然后再用水浸泡,然后缓冲液浸泡10分钟,最后酶解,在酶解之前取出根尖的时候就根冠部分有黑了...

解离一般有两种方法,一种是酸解,一种是酶解。为什么你要同时使用这两种方法呢,没尝试过一起使用,表示不理解。
9楼2013-10-21 10:33:46
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憨憨可爱多

木虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 皮皮5230 at 2013-10-21 10:33:46
解离一般有两种方法,一种是酸解,一种是酶解。为什么你要同时使用这两种方法呢,没尝试过一起使用,表示不理解。...

酶解时间会比较长啊,酸解怕会对染色体造成损伤,我用两种结合一下,节省一些时间,效果也还不错
10楼2013-10-21 11:40:17
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