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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 关于蛋白marker的问题
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sulakitty

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by resurgam at 2012-07-22 15:04:09
marker都跑成这样，真的跑得不太好

额 谢谢啦！  但是谁能回答我的问题啊  为什么两个marker的条带不一致，是我跑的不好的原因？
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11楼2012-07-22 15:06:42
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zhangwenqing

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by sulakitty at 2012-07-22 14:07:51
这个肯定没看错，marker的条带都跑出来了，对应的大小都有...

你做胶的时候是不是没有混均匀啊！怀疑~~~
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12楼2012-07-22 16:07:12
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by sulakitty at 2012-07-22 14:48:46
哦  歪扭可能是因为我染色和脱色的时候都煮胶了，这个跑的真的特别不好吗？...

我跑的这种应该比较正常，10个泳道各个样品都不相同，可以供分析用了。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
13楼2012-07-22 16:26:22
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sadc

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
供分析和发文章用的胶，最好不要煮，过夜室温脱色就好了。
本来可能就容易歪，一煮更无语了。
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14楼2012-07-22 19:03:43
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sadc

木虫 (正式写手)
临走前换2次水。
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15楼2012-07-22 19:04:05
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sulakitty

新虫 (小有名气)
谢谢大家的回复 可能还是我跑胶做的不好，以后染色我尽量过夜染，不煮沸了。
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16楼2012-07-22 20:38:13
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weishu杯子

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
11楼: Originally posted by sulakitty at 2012-07-22 15:06:42
额 谢谢啦！  但是谁能回答我的问题啊  为什么两个marker的条带不一致，是我跑的不好的原因？...

不同的蛋白Marker所需的蛋白胶浓度不一样 你可以看下你的Marker所建议用的蛋白胶浓度是多少
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快乐源于生活!!
17楼2012-07-23 12:01:15
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resurgam

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
11楼: Originally posted by sulakitty at 2012-07-22 15:06:42
额 谢谢啦！  但是谁能回答我的问题啊  为什么两个marker的条带不一致，是我跑的不好的原因？...

可能是marker本身质量不好，也可能是你跑的时候电压太大，也可能是你的电泳缓冲液过多或过少引起的微笑效应。要不你跑完了直接WB算了
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18楼2012-07-23 12:43:23
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daguo0648

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
看你的胶浓度估计在15%左右吧，既然跑高分子，最好跑个8%-10%的胶，这样97和100会区别明显一点，同时有助于判断目标蛋白。另外你的胶跑的却实不好，MK最好不要放在边缘跑，因为会有边缘效应影响MK条带的准确位置。你把胶浓度放低，MK靠近中间孔道，重跑一块胶吧。
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小小爬虫
19楼2012-07-23 16:59:45
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sulakitty

新虫 (小有名气)
引用回帖:
19楼: Originally posted by daguo0648 at 2012-07-23 16:59:45
看你的胶浓度估计在15%左右吧，既然跑高分子，最好跑个8%-10%的胶，这样97和100会区别明显一点，同时有助于判断目标蛋白。另外你的胶跑的却实不好，MK最好不要放在边缘跑，因为会有边缘效应影响MK条带的准确位置。你 ...

谢谢啦
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20楼2012-07-23 20:56:07
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