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[求助]
两个ORF之间一定要有一段ployA序列才能都表达吗？
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构建一个表达载体序列为 CMV启动子－海肾荧光素的ORF－猪瘟5'UTR－萤火虫荧光素ORF 但是在荧光监测的时候只测到了海肾的荧光 后者没有表达 海肾的ORF最后的终止密码子去掉了 ORF跟猪瘟5'UTR之前序列为 GTCGACTAATACGACTCACTATA是构建需要加上的 不知道有没有什么特别的作用 blast搜索也没有什么有用的结果 还有测序结果显示海肾ORF将近结束的位置有一个碱基缺失 不过这在1000bp的位置已经测不准了 而且测到了海肾的荧光 若果真的有碱基缺失 那么会一直向后读大约30个碱基直到一个终止子 并且此终止子位于猪瘟5‘UTR里 想知道是我构建的方式有问题 还是猪瘟5'UTR本身的启动效率低 还是海肾的ORF有碱基缺失造成移码所致 谢谢高手了 |
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