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轻清1106

铜虫 (小有名气)

[求助] 植物DNA提取

我用2%CTAB抽提液提取植物叶绿体DNA，图中前12个孔是氯仿异戊醇抽提3次之后，直接用两倍无水乙醇沉淀-80℃ 30min，70%乙醇洗涤得到的；后12个样品，氯仿异戊醇提2次后，先用-20℃预冷的异丙醇沉淀30min，再用含SDS的SSTE溶液溶解沉淀，之后再用等体积的氯仿异戊醇抽提10min，然后再是两倍无水乙醇沉淀-80℃ 30min，70%乙醇洗涤沉淀。电泳检测结果如图，紫外荧光检测其浓度，OD260/OD280只在1.12左右，这样的结果对SRAP-PCR和ISSR-PCR有影响吗？请各位指教，谢谢！
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1楼 2012-07-19 20:21:00
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水晶海豚00

新虫 (初入文坛)
想与楼主交流下，你做琼脂糖检测时是点样量是多少？加多少溴酚蓝呢？
我也是用简易CTAB法，但提出来的DNA检测时有时都看不到亮带。不知是什么问题，请教下。
还有就是你是用的EB染色吗？一般EB加多少？
O(∩_∩)O谢谢了
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用心生活，就会幸福
4楼2012-07-28 08:54:45
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-07-20 13:40:54
你的OD260/OD280值太低，说明你的样品里蛋白含量高。
楼主你的260/230比值如何？
蛋白多一点对PCR会有影响，但是不会太大，如果260/230如果数值太低说明里面的其他杂质如酚，醇等太多会严重影响结果。
楼主可以用其他人已经发表的做的比较好的引物做下PCR，个人认为是影响不大的。
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2楼2012-07-20 08:23:11
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轻清1106

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chenguestc at 2012-07-20 08:23:11
你的OD260/OD280值太低，说明你的样品里蛋白含量高。
楼主你的260/230比值如何？
蛋白多一点对PCR会有影响，但是不会太大，如果260/230如果数值太低说明里面的其他杂质如酚，醇等太多会严重影响结果。
楼主可以用 ...

检测时，没测量230的吸光值。。我先试试看PCR效果。谢谢你！
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3楼2012-07-26 23:08:17
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轻清1106

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 水晶海豚00 at 2012-07-28 08:54:45
想与楼主交流下，你做琼脂糖检测时是点样量是多少？加多少溴酚蓝呢？
我也是用简易CTAB法，但提出来的DNA检测时有时都看不到亮带。不知是什么问题，请教下。
还有就是你是用的EB染色吗？一般EB加多少？
O(∩_∩) ...

上样量是5μLDNA+1μLLoading Buffer。
用EB染色的，你的Mark亮吗？若亮的话可能是DNA没提出来；要是不亮，可能的问题就比较多了。
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5楼2012-07-30 15:58:52
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