24小时热门版块排行榜

返回列表

jl860822

金虫 (正式写手)

MolEPI: 1
应助: 176 (高中生)
金币: 689.1
散金: 800
红花: 5
帖子: 617
在线: 79.1小时
虫号: 1863997
注册: 2012-06-19
性别: GG
专业: 生物化学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

你这可能是仪器没调好，应该不是胶的问题，还有你这为啥倒着放胶呢？

赞一下

回复此楼

11楼2012-07-20 08:45:52

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

zbxky

铁虫 (小有名气)

应助: 6 (幼儿园)
金币: 62.5
红花: 1
帖子: 66
在线: 10.8小时
虫号: 4030422
注册: 2015-08-20

【答案】应助回帖

1. PCR产物出现拖尾的因素有很多，总结为一条，就是非特异性扩增过多。原因可能是：
（1）模板不纯：纯化模板
（2） Buffer不合适：更换Buffer
（3）退火温度偏低：适当提高退火温度
（4）酶量过多：适量用酶，或调换另一种酶
（5） dNTP、Mg2+浓度偏高：适当降低dNTP和镁离子的浓度
（6）循环次数过多：减少循环次数
（7）模板量少或引物量过多：增加模板量，减少引物的用量

2. 提质粒的时候经常有这种个现象，有可能是样品浓度过高了。这种情况简单，稀释一下就行了。

3. 提基因组DNA的时候也常出现拖尾，最可能的就是提的DNA中掺杂有蛋白质，蛋白质会拽DNA的泳动。所以一定要注意提取基因的操作，减少蛋白质等杂质的出现。

4. 样品破碎或是被降解

5. 存在RNA：DNA前面的一片一般都是未清除的RNA，经过纯化，RNAse处理，就没有了

6. 电泳体系的问题：观察你的marker是否也存在拖尾现象，作为对照
（1）电泳缓冲液TAE或者TBE的污染：。建议更换缓冲液。
（2）上样时样品漂了，建议增加上样缓冲液的用量，以及小心加样。
（3）电压太高：适当降低电压
（4）根据核酸片断大小，适当把加大凝胶浓度。凝胶浓度的选择取决于DNA分子的大小。分离小于0.5kb 的DNA片段所需胶浓度是1.2-1.5%, 分离大于10kb的DNA分子所需胶浓度为0.3-0.7%, DNA片段大小间于两者之间则所需胶浓度为0.8-1.0%。英格恩

赞一下

回复此楼

12楼2015-09-21 16:52:38

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

相关版块跳转我要订阅楼主雨萱的主题更新

返回列表