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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 琼脂糖凝胶电泳的拖尾问题~~~
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你这可能是仪器没调好，应该不是胶的问题，还有你这为啥倒着放胶呢？
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11楼2012-07-20 08:45:52
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zbxky

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

1.    PCR产物出现拖尾的因素有很多，总结为一条，就是非特异性扩增过多。原因可能是：
（1）    模板不纯：纯化模板
（2）    Buffer不合适：更换Buffer
（3）    退火温度偏低：适当提高退火温度
（4）    酶量过多：适量用酶，或调换另一种酶
（5）    dNTP、Mg2+浓度偏高：适当降低dNTP和镁离子的浓度
（6）    循环次数过多：减少循环次数
（7）    模板量少或引物量过多：增加模板量，减少引物的用量

2.    提质粒的时候经常有这种个现象，有可能是样品浓度过高了。这种情况简单，稀释一下就行了。

3.    提基因组DNA的时候也常出现拖尾，最可能的就是提的DNA中掺杂有蛋白质，蛋白质会拽DNA的泳动。所以一定要注意提取基因的操作，减少蛋白质等杂质的出现。

4.    样品破碎或是被降解

5.    存在RNA：DNA前面的一片一般都是未清除的RNA，经过纯化，RNAse处理，就没有了

6.    电泳体系的问题：观察你的marker是否也存在拖尾现象，作为对照
（1）电泳缓冲液TAE或者TBE的污染：。建议更换缓冲液。
（2）上样时样品漂了，建议增加上样缓冲液的用量，以及小心加样。
（3）电压太高：适当降低电压
（4）根据核酸片断大小，适当把加大凝胶浓度。凝胶浓度的选择取决于DNA分子的大小。分离小于0.5kb 的DNA片段所需胶浓度是1.2-1.5%, 分离大于10kb的DNA分子所需胶浓度为0.3-0.7%, DNA片段大小间于两者之间则所需胶浓度为0.8-1.0%。英格恩
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12楼2015-09-21 16:52:38
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