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TLC菜鸟

金虫 (正式写手)

[求助] 血浆除蛋白效果评价

各位高人,小弟要做血浆样品,要除蛋白,但是不知道乙腈的用多大体积,想考察2倍、3倍、4倍乙腈效果,不知道要怎么样去评价哪个效果好,能指导我一下么,谢谢!
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只为活个问心无愧。。
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gjapplefly

铁杆木虫 (正式写手)

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★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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TLC菜鸟: 金币+5, ★★★很有帮助, 但是我要优化加入量的比例,要以什么为标准去评价呢?看上清澄清度? 2012-07-15 22:17:43
leecius: 金币+2, 谢谢! 2012-07-17 09:01:25
甲醇、乙腈、三氯乙酸都可以用于除蛋白,其中甲醇我用过4倍体积,乙腈用过3倍。三氯乙酸最少,50微升血样用15微升即可,但得保证对你的药物无干扰。在不过分稀释药物影响测定的情况下,理论上沉淀剂加多一点效果好。加了沉淀剂后14000转离心15min,如果上清澄清就OK。
2楼2012-07-15 19:30:02
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mc0326

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
TLC菜鸟: 金币+5, ★★★很有帮助, thx 2012-07-16 19:47:35
leecius: 金币+2, 谢谢! 2012-07-17 09:01:36
如果灵敏度比较好的话,就多用一些有机试剂呗,三氯乙酸比较伤仪器,而且有可能会导致样品降解,一般不用。我们一般就是乙腈4倍沉淀。要是灵敏度不够的话沉淀后挥干会好了,总之你要追求沉淀完全还是多用一些,2倍太少了。
3楼2012-07-16 11:39:47
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白水6177

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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感谢参与,应助指数 +1
leecius: 金币+2, 谢谢! 2012-07-17 09:01:44
TLC菜鸟: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 很大帮助,谢谢! 2012-07-17 17:58:53
乙腈沉淀蛋白一般需要3倍体积以上的比例较好。
沉淀效果我曾经这样试验过:(1)选取同等体积的血浆,如200 ul大鼠空白血浆3份。分别加入400、600和800ul的乙腈,平行涡旋混匀,同等条件离心取上清液;(2)分别取三份上清液200ul再加入同等体积的乙腈,涡旋混匀,离心,观察离心后离心管底有无沉淀物发生。(3)选择仍有沉淀物的样本,采集上清液,继续加入同等体积的乙腈进行沉淀...一次类推,对比效果。
4楼2012-07-17 08:44:50
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