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wangdandelia

木虫 (正式写手)

[交流] 回补实验 已有5人参与

请问各位童鞋,我将带有目的基因片段的质粒回补到删除突变株之后,表型并没有得到完全的回复,是怎么回事呢?
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swordhang

金虫 (小有名气)

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
zhang8826857: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-29 17:13:42
1 回补进去的基因是否表达,是否含有原来的的启动子区

2表型是否只与回补进去的基因有关,而与被敲除基因两翼的基因无关,敲除了该基因是否影响侧翼基因的表达
7楼2012-06-28 15:24:49
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shiliu2011

木虫 (正式写手)

★
zhang8826857: 金币+1, 鼓励交流,还是用手机回答的,给力 2012-06-29 17:13:33
个人认为可能的原因:一,表型的改变并不是由于你删除的这个基因决定的,所以补不回去.二,补进去的质粒不能很好的复制,回补基因没有表达.

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2012-06-28 00:23:12
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l68266152

银虫 (小有名气)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
检测一下蛋白表达的情况
相信自己
3楼2012-06-28 09:01:44
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wangdandelia

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by shiliu2011 at 2012-06-28 00:23:12
个人认为可能的原因:一,表型的改变并不是由于你删除的这个基因决定的,所以补不回去.二,补进去的质粒不能很好的复制,回补基因没有表达.

非常感谢!首先突变了这个基因,才使得表型发生改变;回补基因只是部分回复表型,却没有完全回复表型。
4楼2012-06-28 10:17:56
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wangdandelia

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by l68266152 at 2012-06-28 09:01:44
检测一下蛋白表达的情况

请问如何检测呢?
5楼2012-06-28 10:18:15
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l68266152

银虫 (小有名气)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by wangdandelia at 2012-06-28 10:18:15
请问如何检测呢?...

蛋白电泳,western,等
相信自己
6楼2012-06-28 14:29:12
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thestormcong

银虫 (小有名气)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我连基因都没有敲除掉,更别说回补了,楼主能否提供点经验啊。
8楼2012-06-28 15:40:28
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wangdandelia

木虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by swordhang at 2012-06-28 15:24:49
1 回补进去的基因是否表达,是否含有原来的的启动子区

2表型是否只与回补进去的基因有关,而与被敲除基因两翼的基因无关,敲除了该基因是否影响侧翼基因的表达

如果那样的话,接下来的实验可真是麻烦了。
9楼2012-06-28 19:06:25
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wangdandelia

木虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by thestormcong at 2012-06-28 15:40:28
我连基因都没有敲除掉,更别说回补了,楼主能否提供点经验啊。

用的质粒pcm351就可以呀~
10楼2012-06-28 19:06:48
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