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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 回补实验
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wangdandelia

木虫 (正式写手)

[交流] 回补实验 已有5人参与

请问各位童鞋，我将带有目的基因片段的质粒回补到删除突变株之后，表型并没有得到完全的回复，是怎么回事呢？
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1楼 2012-06-27 22:40:37
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swordhang

金虫 (小有名气)
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zhang8826857: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-29 17:13:42
1 回补进去的基因是否表达，是否含有原来的的启动子区

2表型是否只与回补进去的基因有关，而与被敲除基因两翼的基因无关，敲除了该基因是否影响侧翼基因的表达
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7楼2012-06-28 15:24:49
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shiliu2011

木虫 (正式写手)
★
zhang8826857: 金币+1, 鼓励交流，还是用手机回答的，给力 2012-06-29 17:13:33
个人认为可能的原因:一,表型的改变并不是由于你删除的这个基因决定的,所以补不回去.二,补进去的质粒不能很好的复制,回补基因没有表达.

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2012-06-28 00:23:12
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l68266152

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
检测一下蛋白表达的情况
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相信自己
3楼2012-06-28 09:01:44
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wangdandelia

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by shiliu2011 at 2012-06-28 00:23:12
个人认为可能的原因:一,表型的改变并不是由于你删除的这个基因决定的,所以补不回去.二,补进去的质粒不能很好的复制,回补基因没有表达.

非常感谢！首先突变了这个基因，才使得表型发生改变；回补基因只是部分回复表型，却没有完全回复表型。
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4楼2012-06-28 10:17:56
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wangdandelia

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by l68266152 at 2012-06-28 09:01:44
检测一下蛋白表达的情况

请问如何检测呢？
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5楼2012-06-28 10:18:15
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l68266152

银虫 (小有名气)
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引用回帖:
5楼: Originally posted by wangdandelia at 2012-06-28 10:18:15
请问如何检测呢？...

蛋白电泳，western，等
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相信自己
6楼2012-06-28 14:29:12
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thestormcong

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我连基因都没有敲除掉，更别说回补了，楼主能否提供点经验啊。
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8楼2012-06-28 15:40:28
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wangdandelia

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by swordhang at 2012-06-28 15:24:49
1 回补进去的基因是否表达，是否含有原来的的启动子区

2表型是否只与回补进去的基因有关，而与被敲除基因两翼的基因无关，敲除了该基因是否影响侧翼基因的表达

如果那样的话，接下来的实验可真是麻烦了。
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9楼2012-06-28 19:06:25
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wangdandelia

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by thestormcong at 2012-06-28 15:40:28
我连基因都没有敲除掉，更别说回补了，楼主能否提供点经验啊。

用的质粒pcm351就可以呀~
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10楼2012-06-28 19:06:48
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