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[求助]
请教用过反相硅胶柱分离的高手
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我这个东西是正丁醇部分提取的东西，之前他们用大孔砍断效果不好，到我这的时候就上LH-20试了下，效果不错，但是那个上样量太少了160g填料一次上样不到2g，现在老师让我换用反相，所以想请教哈有过使用经验的同仁们。 1.实验室的填料都是前两届的师兄师姐用过的装在一些小柱子里的，有几根都已经干了，这个会不会影响使用，怎么处理？而且，还有点脏，用甲醇反复洗吗？ 2.填料和上样量的比大概是多少，我这个有个麻烦的是填料都湿的了，质量还不好计算。如果这样可不可以按柱体积来 3.样品上样如何选择是湿法还是干法上样 有点罗嗦有点杂，谢谢大家了 |
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【答案】应助回帖
★ ★ ★
长白山的梦: 金币+3, ★★★很有帮助, 很是受用 2012-06-24 09:46:42
长白山的梦: 金币+3, ★★★很有帮助, 很是受用 2012-06-24 09:46:42
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买填料的技术老师告诉我 1. 一般情况下的常规清洗可以使用100%甲醇，100%丙酮。 2. 长时间柱内正常有机物污染，可用75%丙酮：25%异丙醇，或100%异丙醇。 3. 顽固有机污染物污染时可以使用100%乙酸乙酯，100%正己烷。4.使用正己烷或乙酸乙酯前要用异丙醇冲洗柱子保持溶剂相溶。 5.一般情况下要冲洗10个以上的柱体积，冲洗过程中要注意柱子的压力，压力过高时降低流速进行清洗。 还有可以用 tris 洗，但是具体浓度什么的我忘了，我试过tris和丙酮，感觉作用不大。其实有点污染也没事，你要是实在怕污染你的样品的话可以梯度洗几个体积，然后把液体旋干 看看有没有质量。。。我看到网上有人这么做。。。 乙腈我挺少用的。只是在做液相的时候用，看你这么一说感觉你比我爱惜自己多多了。哈哈~ 谈不上请教啦，都是互相交流下，想当初我刚做的时候也好多不懂，现在也是。。都是在不断的学习吧 |
10楼2012-06-21 20:18:48
rose.no.9
木虫 (著名写手)
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- 专业: 天然有机化学
2楼2012-06-20 16:45:41
【答案】应助回帖
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
长白山的梦: 金币+2, ★有帮助 2012-06-21 09:48:01
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反相硅胶也叫ODS，用甲醇装柱子，用甲醇-水做洗脱剂，开始用低济度的甲醇，慢慢加大甲醇的量，最后用甲醇冲柱子，用甲醇保存就可以了 还可以用：1，推荐你使用HPLC试试。也是选用反向硅胶柱，流动相为乙腈-水或者是甲醇-水。这样的分离效果和分离效率肯定比你自己装柱子要高很多倍！而且你的样品是黄酮类的天然产物，那么它的或是它这一类的化合物的HPLC分离条件文献中可定有大量记载，你也有参考依据了！自己装的反相硅胶柱酯适合于分离极性差别明显的两种或三种等样品的分离，如果要分离物的种类很多的话，是没有明显效果。 2， 推荐你使用正相硅胶柱层析方法试试。原理和反向类似，只是出峰顺序相反。个人觉得对你这种要分离的天然产物，正相硅胶柱层析较反向更有优势。而且天然产物的这种分离条件文献中也要大量记载，你可以在参考的基础上进行优化。 1关于你说的反相硅胶柱用的应该不是中压色谱系统而是就用了个泵在跑，那么就没有紫外检测，可以选择跑柱同时点板检测，所以先判断你样品有没有颜色，如果有，在有颜色时接的瓶多一些。 2关于洗脱剂和梯度建议参考文献 3上样量一般比较纯的话上样量不大于 0.5g/120g 填料 |
3楼2012-06-20 17:13:26
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
长白山的梦: 金币+12, ★★★★★最佳答案, 谢谢 2012-06-21 09:47:21
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1.实验室的填料都是前两届的师兄师姐用过的装在一些小柱子里的，有几根都已经干了，这个会不会影响使用，怎么处理？而且，还有点脏，用甲醇反复洗吗？ 脏的把柱头挖了吧！！挖出来的用来拌样挺好。干了的多用甲醇冲冲。。也可以梯度冲，说不定能把脏东西冲出来，但是梯度不要跨太大。 2.填料和上样量的比大概是多少，我这个有个麻烦的是填料都湿的了，质量还不好计算。如果这样可不可以按柱体积来 我25g ods最多上过600~800mg吧 3.样品上样如何选择是湿法还是干法上样 能用初始流动相最好了。。。用水更好，反正最好少加甲醇，有一次我用50%甲醇溶样， 30%甲醇起始浓度，结果样品一下子全部泄露了。。悲剧~ 但这和你样品的性质也有关系，某些样品，如黄酮苷吧，我感觉50um的ods对其吸附能力就比较弱。。。。 实在水难容的就用脏的ods拌样，舍不得的话就用硅藻土拌样，硅藻土是别人教的，，，但是如果是加压的话，记得中间一定要加个筛板，别吧硅藻土冲到柱子里了。。 也可以上面接一个超级小柱子，专门装拌好的硅藻土和样品，我就是这么干的。 |
4楼2012-06-20 21:56:03
mlanqiang
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