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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 手提基因组方法遇到的问题
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雪湛蓝

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by diershimu at 2013-03-04 23:00:00
楼主你好，首先非常感谢你能在百忙之中抽出时间看我的问题并耐心的给我回复，我真的非常感谢你，看完回复后我发现我的步骤没有加入溶菌酶，为了更清楚的说明，我把整个步骤贴在了下面，里面只有用SDS及酚氯仿，我真 ...

你用的什么菌株？！其细胞壁中的胞壁酸的含量是不是很多？如果很多的话，在不加入溶菌酶降解胞壁酸的情况下，应该就是出现粘稠样液体的原因。这是我的分析，所以我的建议是：在第（2）至第（3）步之间再用溶菌酶处理一下。
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脚踏实地追求科学真理！
11楼2013-03-05 09:52:55
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diershimu

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我用的是迟缓爱德华氏菌，这是一种革兰氏阴性菌。我刚做实验，也不知道胞壁酸含量是不是很多，请问楼主如何知道胞壁酸含量多不多呀？谢谢了。另外，我昨天又用上面相同的步骤提了一次基因组，在加入酚氯仿离心分层后发现上层液体不如以前粘了，小心吸的话还是可以吸上来的，但在快吸完上清液时还是感觉黏黏的，不好再吸上来了，我一个月前将菌液离心后，将细菌沉淀放在-20℃的冰箱里保存，现在就是用这个沉淀，加入NaCl重悬浮的，不知道跟材料存放的时间及状态有没有关系呀？
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12楼2013-03-05 17:17:20
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雪湛蓝

铁杆木虫 (正式写手)
怎么测这个胞壁酸等细胞壁成分我也不清楚，你可以适当的将你的步骤中的某些时间延长，同时按我说的加入溶菌酶做一次对照。至于冻存是否影响，这个我没试过，也不好给说。
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脚踏实地追求科学真理！
13楼2013-03-06 09:03:42
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